FUNDAMENTO: Estudos recentes descrevem a participação de espécies reativas de oxigênio e nitrogênio na hipertensão. OBJETIVO: Identificar o desbalanço redox em sangue de hipertensos. MÉTODOS: Superóxido dismutase (SOD), catalase (CAT), glutationa peroxidase (GPx), glutationa (GSH), vitamina C, transferrina, ceruloplasmina, malondialdeído (MDA) e o grupo carbonila, foram quantificados no sangue de 20 hipertensos e 21 controles. Os indivíduos tinham um Índice de Massa Corporal de > 18,5 e < 30 kg/m², glicemia < 100 mg/dL, colesterol sérico < 200 mg/dL, e eram mulheres não fumantes, não grávidas e não lactantes, não usuárias de alopurinol e probucol, e hipertensos em medicação anti-hipertensiva. Todos os indivíduos foram submetidos a um período preparatório de quatro semanas sem álcool, suplementos vitamínicos, dexametasona e paracetamol. RESULTADOS: Níveis reduzidos de CAT (p = 0,013), GSH ( p = 0,003) e MDA (p = 0,014), e altos níveis de GPx (p = 0,001) e ceruloplasmina (p = 0,015) foram obtidos no grupo de hipertensos, em comparação com os controles. Foi verificada uma correlação positiva entre a pressão sistólica e o MDA nos hipertensos e diastólica e CAT nos controles. CONCLUSÃO: Os dados obtidos são sugestivos de que os hipertensos apresentavam desequilíbrio em reações redox, a despeito do possível efeito atenuante de sua medicação anti-hipertensiva.
IUniversidade Federal de Alagoas-UFAL; Maceió, AL-Brasil
IIInstituto de Química e Biotecnologia-IQB; Maceió, AL-Brasil
IIIInstituto de Ciências Biológicas e da Saúde-ICBS; Maceió, AL-Brasil
IVFaculdade de Nutrição-FANUT; Maceió, AL-Brasil
VFaculdade de Medicina-FAMED; Maceió, AL-Brasil
VIUniversidade Federal do Rio Grande do Sul-UFRG; Porto Alegre, RS-Brasil
A hipertensão vem sendo objeto de muitos estudos, em razão da alta prevalência e de grande impacto na morbimortalidade: levantamentos populacionais realizados em várias cidades brasileiras indicam sua prevalência em 22,3% a 43,9%1.
Dentre os fatores associados ao desenvolvimento da hipertensão, uma questão extremamente importante, complexa e atual é a participação de espécies reativas de oxigênio (ERO) e de espécies reativas de nitrogênio (ERN) em sua patogênese. Dessa forma, a hipótese oxidativa de hipertensão se baseia no fato de que o endotélio vascular, o órgão central para a hipertensão, é o local onde ocorrem numerosos processos de redução e oxidação, especialmente por meio das enzimas NAD(P)H oxidase, xantina oxidase (XO) e da óxido nítrico sintase endotelial (eNOS), que agem aumentando a produção de ânion radical superóxido (O2•-), mas também por meio de forças mecânicas que estimulam a produção de O2•-. A produção excessiva de O2•- favorece a reação com o óxido nítrico (•NO) e forma o peroxinitrito (ONOO-), um intermediário reativo particularmente perigoso, uma vez que é capaz de formar o radical hidroxila (•OH), independentemente da presença de metais de transição. Dentre outros fenômenos associados, o desvio do •NO de sua função vasodilatadora promove o crescimento de células endoteliais e da vasoconstrição2-13. O estresse oxidativo pode ser determinado por meio de biomarcadores do equilíbrio de reações de oxidação e redução, que são quantificáveis em fluidos biológicos14.
O principal objetivo deste estudo foi quantificar alguns antioxidantes e marcadores de dano oxidativo no sangue de um grupo de hipertensos e controles.
Os indivíduos incluídos no estudo eram residentes do município de Flexeiras, Alagoas (AL), Brasil, um município de pequeno porte, com área de 316 quilômetros quadrados, com uma população de 11.881 habitantes, localizado na região da Zona da Mata do Estado de Alagoas, no Nordeste do Brasil, a 60 quilômetros de distância da capital do Estado, Maceió. A principal receita de Flexeiras advém da monocultura da cana-de-açúcar, de acordo com o IBGE (
Os participantes deste estudo foram selecionados de uma amostra de 433 dos 803 hipertensos cadastrados pelas equipes de saúde da família do município de Flexeiras em 2005. Representavam 53,92% dos hipertensos com seguimento pela saúde pública local. Os 433 hipertensos foram avaliados de janeiro a junho de 2005, com base em dados antropométricos (peso, altura, circunferência da cintura), dados clínicos (níveis de pressão arterial, diagnóstico de diabete, uso de medicamentos), dados bioquímicos (glicemia em jejum, colesterol total e triglicerídeos, após 12 horas de jejum), e estilo de vida (fumo, sedentarismo). Os critérios de inclusão foram: (1) pacientes com hipertensão1; (2) 40 a 60 anos; (3) não obesos, com Índice de Massa Corporal(IMC)
Sessenta e três indivíduos não hipertensos (grupo controle), voluntários, também moradores de Flexeiras, assinaram o formulário de consentimento livre e esclarecido e foram submetidos aos mesmos critérios de seleção.
Os protocolos aderiram aos princípios da Declaração de Helsinki e os pacientes que estavam em conformidade com os critérios de seleção foram incluídos após leitura e assinatura dos formulários de consentimento livre e esclarecido aprovado pelo Comitê de Ética em Pesquisa da Universidade Federal de Alagoas (UFAL), em processo nº 009991/2004-79, de 20 de novembro de 2005.
Além das informações citadas, houve levantamento dos indivíduos com relação à classe social, com base nos Critérios de Classificação Econômica Brasil (CCEB) da Associação Brasileira de Empresas de Pesquisa de Mercado (ABEP), renda
Os indivíduos selecionados foram orientados a interromper o uso de medicação interferente, como suplementos vitamínicos e minerais, paracetamol, dexametasona e bebidas alcoólicas quatro semanas antes da coleta do sangue. Durante esse período, os indivíduos foram contatados sistematicamente por meio de visitas domiciliares e telefonemas para garantir que a fase preparatória estava sendo seguida.
Após 12 horas de jejum, as amostras sanguíneas foram coletadas e depositadas em tubos de coleta a vácuo em três frações do sangue total: (1) de 10 mL em heparina para análise das enzimas antioxidantes: superóxido dismutase (SOD), glutationa peroxidase (GPx) e catalase (CAT), glutationa (GSH), todos eles em eritrócitos e carbonila em plasma; (2) 5 mL em EDTA para o hemograma, e (3) 5 mL, sem anticoagulante para as leituras de ácido úrico, ceruloplasmina (CER), transferrina, malondialdeído (MDA) e vitamina C no soro. Todo o sangue foi centrifugado a 3.000 rpm por 5 min. Uma fração de 500 mL de soro foi armazenada em triplicata, a uma temperatura de -20ºC, enquanto uma fração de 500 mL de soro, uma fração de 200 mL de plasma e quatro frações de 500 mL de plasma foram armazenadas em triplicata a uma temperatura de -80ºC.
A atividade da SOD, CAT e GPx foi determinada, respectivamente, de acordo com o kit de enzimas RANDOX-Ransod, método de Aebi e método de Paglia e Valentine. GSH foi determinada de acordo com o método de Akerboom e Sies, carbonila de acordo com o método de Levine, e MDA e vitamina C por HPLC-UV, conforme método de Katepe. A CER e a transferrina foram analisadas com o kit de teste quantitativo Spinreact. Todos os métodos utilizados foram descritos por Vasconcelos e col14.
A análise estatística envolveu inicialmente a aplicação do teste de Kolmogorov-Smirnov para verificar a distribuição Gaussiana. Para comparar os grupos, o teste
Dos 433 hipertensos, 24 (5,5%) estavam em conformidade com os critérios de seleção e 20 (4,6%) concluíram o protocolo. No que tange ao grupo de controle, dos 63 voluntários estudados, 21 (33,33%) estavam em conformidade com os critérios de seleção e concluíram o protocolo. Portanto, o estudo foi conduzido com 20 hipertensos e 21 controles, cujas características demográficas, socioeconômicas, antropométricas e bioquímicas foram relacionadas na
Os hipertensos eram submetidos à terapia anti-hipertensiva e eram usuários regulares de medicação anti-hipertensiva (
Os indivíduos hipertensos apresentaram níveis diminuídos de SOD, CAT, GSH, transferrina e MDA no sangue e níveis elevados de GPx, ascorbato, CER e carbonila no sangue, quando comparados aos controles. No entanto, apenas os níveis de CAT, GSH e MDA no sangue (diminuídos) e de GPx e CER (aumentados) apresentaram diferenças significativas (
Os testes de correlação de Pearson e Spearman revelaram uma correlação positiva entre PAS e MDA (r = 0,44 e p = 0,04) nos hipertensos, e entre PAD e CAT (r = 0,54 e p = 0,01) nos controles. Dentre os biomarcadores, uma correlação negativa foi verificada entre MDA e GPx nos dois grupos (r = -0,63 e p = 0,003 nos hipertensos e r = -0,63 e p = 0,004 nos controles).
Um estudo epidemiológico constatou uma associação positiva entre o estresse oxidativo aumentado e a redução do
Estudos clínicos demonstraram uma atividade de enzimas antioxidantes diminuída entre hipertensos quando comparada aos controles17,18, mas ainda não está claro se essa é uma causa ou uma consequência da hipertensão. O estresse oxidativo em um processo crônico como a hipertensão poderia consumir as reservas e prejudicar a atividade de enzimas antioxidantes.
Em vista do que discutimos anteriormente, é possível prever níveis altos de dano oxidativo e níveis baixos de antioxidantes em hipertensos. No entanto, no presente estudo, o grupo de hipertensos apresentou níveis mais baixos apenas dos antioxidantes CAT e GSH, níveis mais altos de GPx e CER, e níveis mais baixos do marcador de dano oxidativo, MDA, em comparação com o grupo de controle (
A catalase pode ser inibida na presença de O2•-removido inadequadamente, gerando ferroxicatalase, que não decompõe H2O2 rapidamente10. Isso explicaria não só os níveis de CAT baixos, mas também os níveis de GPx altos, possivelmente indicando uma maior demanda por essa enzima, uma vez que é capaz de reduzir ONOO- de maneira eficiente, impedindo, assim, a oxidação de cadeias macromoleculares e a nitração de proteínas10. Além disso, embora não tenham sido constatadas diferenças significativas na SOD, é possível considerar que os níveis reduzidos dessa enzima eram provavelmente devidos à reação de O2•- e •NO, que é mais rápida do que a reação de O2•- e SOD, além do fato de que ela age de maneira mais eficiente em condições fisiológicas (baixa concentração de O2•-). Retornando à CAT, pode-se considerar que, com O2•- "desviado" para formar ONOO-, a produção de H2O2 por meio da SOD é menor ou permanece em níveis normais, não exigindo uma atividade adicional. Além disso, conforme mencionado anteriormente, essa enzima pode ser inibida na presença de O2•- acumulado e sua ação ação é delimitada no peroxissoma das células.
Com relação à terapia farmacológica, as medicações anti-hipertensivas que agiam como antioxidantes eram: (1) inibidores de ACE e bloqueadores de receptores de AT1, que agem indiretamente pela inibição do sistema renina-angiotensina-aldosterona (SRAA), uma importante fonte de ERO no endotélio3,4,7,8,11; (2) betabloqueadores de terceira geração, por meio do aumento da liberação de •NO e glutationa na célula endotelial21; e (3) bloqueadores dos canais de cálcio, com o aumento da disponibilidade de óxido nítrico na célula endotelial e aumento da expressão de MnSOD nas células musculares lisas vasculares22.
No grupo de hipertensos, o uso de um inibidor de ECA (captopril) em 60% dos pacientes (40% com 25 mg/dia e 20% com 50 mg/dia) exige comentários adicionais. O mecanismo antioxidante dessa medicação, embora indireto e sem uma relação dose-resposta definida, envolve a inibição do SRAA por meio da inibição da ação da angiotensina II (ANG II), que corresponde a sua ação antioxidante. ANG II é um potente estímulo para a produção de ERO na célula endotelial, aumentando a atividade de NAD(P)H oxidase. Além disso a ANGII supra-regula a atividav de da eNOS, a qual se acompanha de desacoplamento e redução na produção de •NO e aumento na produção de superóxido10. Esse efeito foi verificado em um estudo que encontrou uma associação inversa entre o F2-isoprostano e o número e tipo de medicação anti-hipertensiva [na qual 46% correspondia ao inibidor de ECA tratado e 26%, a um bloqueador de receptor de angiotensina-1 (AT1)]23. Além disso, a ação antioxidante de betabloqueadores e antagonistas de receptores de AT1 também foi relatada em um estudo de hipertensos tratados com esses medicamentos, cujos níveis de SOD, CAT e GPx aumentaram e os níveis de 8-oxo-2'-desoxiguanosina e MDA reduziram24. Em contraste, um outro estudo25 constatou uma capacidade antioxidante aumentada no plasma de hipertensos em uso de diuréticos tiazídicos, mas não constatou a mesma correlação positiva com o inibidor de ECA e betabloqueador, a despeito de sua ação antioxidante.
A correlação positiva evidenciada entre PAS e MDA em hipertensos é indicativa da associação entre a HAS e o estresse oxidativo, especialmente após a relação negativa obtida entre MDA e GPx nos dois grupos.
Como a glutationa age em conjunto com a GPx, os resultados foram analisados em conjunto, considerando que ambas são fundamentais na defesa contra a peroxidação lipídica, provocada por ONOO-. Cada unidade de GPx age por meio do consumo de duas moléculas de GSH, que é o antioxidante intracelular mais importante e está presente na célula predominantemente na forma reduzida (GSH), em detrimento da forma oxidada (GSSG). A razão GSH/GSSG > 1, que é vital para a célula, é mantida por um sistema de reciclagem eficiente de GSH a partir de GSSG10.
Na hipertensão, foram encontrados baixos níveis de GSH e a razão de GSH/GSSG <118. Neste estudo, a GSSG não foi medida. Nossos resultados de níveis baixos de GSH são coerentes com a literatura e seriam explicados pelo estresse oxidativo, uma vez que a ERO oxida a GSH em GSSG, levando a uma queda na GSH, o que é agravado pela conversão da GSH em GSSG no processo de desintoxicação do peróxido, pela ação da GPx.
Com relação ao ácido úrico e à vitamina C, os níveis mais elevados observados no grupo de hipertensos não foram estatisticamente diferentes, embora se saiba que a hiperuricemia está associada com a hipertensão28 e a atividade antioxidante do urato envolve diferentes reações (com R•, ROO•, ONOO-, e ONO2•)10,14 agindo de forma cíclica, uma vez que pode ser recuperado pelo ascorbato, dentre outros. Ademais, é considerado um antioxidante plasmático potente, uma vez que sua concentração no plasma é dez vezes maior do que outros antioxidantes, como as vitaminas E e C13.
Os níveis de transferrina foram semelhantes nos dois grupos, mas os níveis de ceruloplasmina, que também é uma ferroxidase, foram maiores no grupo de hipertensos (
Foi observada uma diminuição no fenômeno da peroxidação lipídica (LP) entre os hipertensos, já que a presença do MDA (o aldeído reativo mais abundante de PL) no soro desses indivíduos era menor do que no soro dos controles (
Diversos estudos constataram uma correlação positiva entre níveis elevados de MDA e as doenças cardiovasculares, como o infarto agudo do miocárdio, a insuficiência cardíaca congestiva e a hipertensão29-31 em hipertensos sem terapia farmacológica18 e em hipertensos idosos utilizando medicação anti-hipertensiva32. Por sua vez, estudos envolvendo hipertensos que nunca foram tratados33 e hipertensos tratados23,34 não constataram diferenças entre hipertensos e controles nos níveis de F2-isoprostano, um outro marcador de peroxidação lipídica, a despeito da ação antioxidante dos medicamentos anti-hipertensivos. No entanto, outro estudo encontrou uma correlação positiva entre esse marcador de dano e marcadores de inflamação em hipertensos ainda não submetidos à terapia farmacológica35. Os pacientes com insuficiência cardíaca congestiva de classe II a classe IV mostraram níveis diminuídos de MDA36. Os resultados indicam a possível associação entre mecanismos de proteína de LP, tais como GPx e CER, que foram encontrados em níveis elevados.
É importante ressaltar que, na população do estudo, um viés existente era o uso de medicação. Entretanto, a terapia farmacológica anti-hipertensiva (em especial medicações bloqueadoras de canais de cálcio e inibidores da ECA) produz um aumento significativo do •NO, mas os níveis de enzimas antioxidantes permanecem baixos quando comparados a normotensos17. Outro aspecto significativo é a possibilidade de o CER de inibir a oxidação de proteínas, o que foi verificado em uma cultura de células endoteliais, por meio da formação de carbonila na presença de ceruloplasmina38.
O fenômeno do estresse oxidativo, bem como o sistema antioxidante funcionam de forma integrada, com uma série de eventos relacionados. Essa característica e a complexidade desses processos necessariamente exigem uma discussão não individualizada. Além disso, é preciso ter em mente a dualidade do ambiente de reações de oxidação e redução: níveis elevados de antioxidantes não são necessariamente desejáveis, e níveis baixos de antioxidantes, indesejáveis, uma vez que os dois podem resultar em estresse oxidativo.
Embora não seja claro se o estresse oxidativo na hipertensão é uma causa ou um efeito, a ocorrência de estresse oxidativo na hipertensão foi verificada neste estudo, corroborando as constatações publicadas anteriormente.
A função do estresse oxidativo na hipertensão já está clara e bem fundamentada. No entanto, embora vários estudos apontem para a disfunção endotelial e para o desequilíbrio entre as espécies reativas de oxigênio e nitrogênio e para as defesas antioxidantes, não é possível definir se o desequilíbrio em reações de redução e oxidação é uma causa ou uma consequência da homeostase da pressão arterial. Este estudo revelou estresse oxidativo na hipertensão. Não obstante, são necessários estudos adicionais para elucidar os mecanismos que levam a sua gênese e de outras situações clínicas caracterizadas por disfunção endotelial envolvendo desequilíbrio em reações de redução e oxidação. Desse modo, nosso grupo de pesquisa está atualmente desenvolvendo estudos sobre os biomarcadores do desequilíbrio em reações de redução e oxidação em pacientes com síndrome metabólica, hipertensão refratária e diabete melito que, como a hipertensão, são doenças cujo denominador comum é a disfunção endotelial.
Por fim, pode-se concluir que, com relação a antioxidantes e marcadores de dano oxidativo, os níveis de CAT e GSH diminuídos e os níveis elevados de ceruloplasmina encontrados em pacientes hipertensos indicam que eles se encontram em estresse oxidativo, a despeito do possível efeito atenuante de sua medicação anti-hipertensiva. Níveis altos de GPx e MDA também podem advir do estresse oxidativo, uma vez que (1) a enzima estaria sujeita a uma maior demanda na presença de ONOO- em excesso, uma espécie reativa característica da hipertensão, e (2) devido à sua ação significativa no ROO-, haveria uma diminuição na na peroxidação lipídica, com a consequente redução de MDA. Assim, o estresse oxidativo da hipertensão, no que concerne a esses biomarcadores, seria explicado por um mecanismo alternativo.
Os autores agradecem aos pacientes e voluntários que participaram deste estudo de maneira tão prestimosa.
Declaro não haver conflito de interesses pertinentes.
O presente estudo foi financiado pela FAPEAL, CNPq, CAPES, CAPES/COFECUB, CNPq/PADCT, BNB e FAPEAL/SESAU-AL, MS/DECIT-PPSUS.
Este artigo é parte de tese de Doutorado de Sandra Mary Lima Vasconcelos pela Universidade Federal de Alagoas com análise de biomarcadores redox em parceria com a Universidade Federal do Rio Grande do Sul.
1. Sociedade Brasileira de Cardiologia. VI Diretrizes Brasileiras de Hipertensão. Rev Hipertens. 2010;17(1):1-66.
2. Touyz RM. Oxidative stress and vascular damage in hypertension. Curr Hypertens Rep. 2000;2(1):98-105.
3. Griendling KK, Fitzgerald GA Oxidative stress and cardiovascular injury. Part I: basic mechanisms and in vivo monitoring of ROS. Circulation. 2003;108(16):1912-6.
4. Griendling KK, Fitzgerald GA. Oxidative stress and cardiovascular injury. Part II: animal and humans studies. Circulation. 2003;108(17):2034-40.
5. Touyz RM. Reactive oxygen species, vascular oxidative stress, and redox signaling in hypertension. What is the clinical significance? Hypertension. 2004;44(3):248-52.
6. Touyz RM, Schiffrin EL. Reactive oxygen species in vascular biology: implications in hypertension. Histochem Cell Biol. 2004;122(4):339-52.
7. Portaluppi F, Boari B, Manfredini R. Oxidative stress in essencial hypertension. Curr Pharm Design. 2004;10(14):1695-8.
8. Sampaio WO, Santos RAS. Aplicações clínicas dos mecanismos fisiopatológicos da hipertensão arterial. Sistema renina-angiotensina: bases fisiopatológicas. Rev Bras Hipertens. 2004;11:67-70.
9. Paravicini TM, Touyz RM. Redox signaling in hypertension. Cardiovasc Res. 2006;71(2):247-58.
10. Halliwell B, Gutteridge JMC. Free radical in biology and medicine. 4 ed. Oxford: Oxford University Press; 2007.
11. Vasconcelos SML, Goulart MOF, Silva MAM, Gomes ACM. Hipótese oxidativa da hipertensão arterial: uma mini-revisão. Rev Bras Hipertens. 2004;14:269-74.
12. Kuklinska AM, Mroczko B, Muzial WJ, Usowicz-Szarynska M, Borowska H, Knapp M, et al. Diagnostics biomarkers of essential hypertension: the value of prostacyclin, nitric oxide, oxidize-LDL, and peroxide measurements. Int Heart J. 2009;50(3):341-51.
13. Pinho RA, Araujo MC, Ghisi GLM, Benetti M. Doença arterial coronariana, exercício físico e estresse oxidativo. Arq Bras Cardiol. 2010;94(4):549-55.
14. Vasconcelos SML, Goulart MOFG, Moura JBF, Manfredini V, Benfato MS, Kubota LT. Espécies reativas de oxigênio e nitrogênio, antioxidantes e marcadores de estresse oxidativo em sangue humano:principais métodos analíticos para sua determinação. Quim Nova. 2007;30:1323-38.
15. Trevisan M, Brown R, Ram M, Muti P, Freudenheim J, Carosella AM, et al. Correlates of markers of oxidative status in the general population. Am J Epidemiol. 2001;154(4):348-56.
16. Cai H, Harrison DG. Endothelial dysfunction in cardiovascular disease: the role of oxidant stress Circ Res. 2000;87(10):840-4.
17. Khullar J, Relan V, Sherawat BS. Antioxidant activites and oxidative stress byproducts in human hypertension. Hypertension. 2004;43(2):e7-8.
18. Rédon J, Oliva MR, Tormo C, Giner V, Chaves J, Iradi A, et al. Antioxidant activities and oxidative stress byproducts in human hypertension. Hypertension. 2003;41(5):1096-101.
19. Pedro-Botet J, Covas MI, Martin S, Rubies-Prat J. Decrease endogenous antioxidant enzymatic status in essential hypertension. J Hum Hypertens. 2000;14(6):343-5.
20. Ide T, Tsutsui H, Ohashi N, Hayashidani S, Suematsu N, Tsuchihashi M, et al. Greater oxidative stress in healthy young men compared with premenopausal women. Arterioscler Thromb Vasc Biol. 2002;22(3):438-42.
21. Kalinowski L, Dobrucki L, Szczepanska-Konkel W, Jankowiski M, Martyniec L, Angielski S, et al. Third-generation beta-blockers stimulate nitric oxide release from endothelial cells through ATP efflux: a novel mechanism for antihypertensive action. Circulation. 2003;107(21):2747-52.
22. Berkels R, Egink G, Marsen TA, Bartels H, Roesen R, Klaus W. Nifedipine increases endothelial nitric oxide bioavailability by antioxidative mechanisms. Hypertension. 2001;37(2):240-5.
23. Ward NC, Hodgson JM, Puddey IB, Mori TA, Beilin LJ, Croft D. Oxidative stress in human hypertension: association with antihypertensive treatment, gender, nutrition, and lifestyle. Free Radic Biol Med. 2004;36(2):226-32.
24. Sáez GT, Tormos C, Giner V, Chaves J, Lozano JV, Iradi A, et al. Factors related to the impact of antihypertensive treatment in antioxidant activities and oxidative stress by-products in human hypertension. Am J Hypertens. 2004;17(9):809-16.
25. Skalska A, Gasowski J, Stepniewski M, Grodziki T. Antioxidative protection in hypertensive patients treated with diuretics. Am J Hypertens. 2005;18(8):1130-2.
26. Johnson RJ, Rodriguez-Iturbe B, Kang DH, Feig DI, Herrera-Acosta J. A unifying pathway for essential hypertension. Am J Hypertens. 2005;18(3):431-40.
27. Shukla N, Maher J, Masters J, Angelini GD, Jeremy JY. Does oxidative stress change ceruloplasmin from a prospective to a vasculopathic factor? Atherosclerosis. 2006;187(2):238-50.
28. Fox PL, Mazumder B, Ehrenwald E. Ceruloplasmin and cardiovascular disease. Free Radic Biol Med. 2000;28(12):1735-44.
29. Pucheu S, Coudray C, Vanazetto G, Favier A, Machecourt J, De Leiris J. Assessment of radical activity during the acute phase of myocardial infarction following fibrinolysis: utility of assaying plasma malondialdehyde. Free Radic Biol Med. 1995;19(6):873-81.
30. Diaz-Vélez CR, Garcia-Castiñeiras S, Mendoza-Ramos E, Hernández-López E. Increased malondialdehyde in peripheral blood of patients with congestive heart failure. Am Heart J. 1996;131(1):146-52.
31. Ghiadoni L, Magaga A, Versari D, Kardasz I, Huang Y, Taddei S, et al. Different effect of antihypertensive drugs on conduit artery endothelial function. Hypertension. 2003;41(6):1281-6.
32. Kedziora-Kornatowska K, Czuczejko J, Pawluk H, Kornatowski T, Motyl J, Szadujkis-Szadurski L, et al. The markers of oxidative stress and activity of the antioxidant system in the blood of elderly patients with essential arterial hypertension. Cell Mol Biol Lett. 2004;9(4A):635-41.
33. Cracowski JL, Baguet JP, Ormezzano O, Bessard J, Stanke-Labesque F, Bessard G, et al. Lipid peroxidation is not increased in patients with untreated mild-to-moderate hypertension. Hypertension. 2003;41(2):286-8.
34. Minuz P, Patrignani P, Gaino S, Degan M, Menapace L, Tommasoli R, et al. Increased oxidative stress and platelet activation in patients with hypertension and renovascular disease Circulation. 2002;106(22):2800-5.
35. Cottone S, Mulè G, Nardi E, Vadalà A, Guarneri M, Briolotta C, et al. Relation of C-reactive protein to oxidative stress and to endothelial activation in essential hypertension. 36. Sundal S, Sharma M, Negi PC, Katoch SS. Oxidative stress and antioxidant profile in patients of heart failure. Asian J Exp Sci. 2005;19:41-58.
37. Shacter E. Quantification and significance of protein oxidation in biological samples. Drug Metab Rev. 2000;32(3-4):307-26.
38. Krsek-Staples JA, Webster RO. Ceruloplasmin inhibits carbonyl formation in endogenous cell proteins. Free Radic Biol Med. 1993;14(2):115-25.
Correspondência: Sandra Mary Lima Vasconcelos Av. Dr. Hamilton Falcão, 379 - Cond. Chácaras da Lagoa, quadra F, lote 13 - Santa Amélia 57063-250 - Maceió, AL, Brasil E-mail:
Artigo recebido Artigo recebido em 10/06/10; revisado recebido em 14/12/10; aceito em 08/02/11.
Full texts in English -
BACKGROUND: Recent studies describe the participation of reactive oxygen and nitrogen species in hypertension. OBJECTIVE: To identify the redox imbalance in the blood of hypertensive. METHODS: Superoxide dismutase (SOD), catalase (CAT), glutathione peroxidase (GPx), glutathione (GSH), vitamin C, transferrin, ceruloplasmin, malondialdehyde (MDA) and carbonyl group were quantified in the blood of 20 hypertensives and 21 controls. The individuals had a Body Mass Index of > 18.5 and < 30 kg/m², glycemia < 100 mg/dL, serum cholesterol < 200 mg/dL, and were nonsmokers, non-pregnant and non-lactating women, non-users of alopurinol and probucol, with hypertensives on antihypertensive medication. All individuals underwent a preparatory period of 4 weeks without alcohol, vitamin supplements, dexamethasone and paracetamol. RESULTS: Reduced levels of CAT (p 0.013), GSH (p 0.003) and MDA (p 0.014), and high levels of GPx (p 0.001) and ceruloplasmin (p 0.015) were obtained in the hypertensive group compared with controls. A positive correlation between systolic pressure and MDA in hypertensive and diastolic pressure and CAT in controls was obtained. CONCLUSION: The data obtained suggest that the hypertensives were in redox imbalance, despite the possibly attenuating effect of their antihypertensive medication.
IUniversidade Federal de Alagoas-UFAL; Maceió, AL-Brasil
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VIUniversidade Federal do Rio Grande do Sul-UFRG; Porto Alegre, RS-Brasil
Hypertension has been the object of many studies due to its high prevalence and high impact on morbidity and mortality: population-based surveys conducted in various Brazilian cities indicate its prevalence in 22.3% to 43.9%1.
Among the factors associated with the development of hypertension, an extremely important, complex and current one is the participation of reactive oxygen species (ROS) and reactive nitrogen species (RNS) in its pathogenesis. Hence, the oxidative hypothesis of hypertension is based on the fact that the vascular endothelium, the central organ within the scope of hypertension, is the site of a number of redox processes, mainly through the enzymes NAD(P)H oxidase, xanthine oxidase (XO), and endothelial nitric oxide synthase (eNOS), which act not only by increasing the production of superoxide radical anion (O2•-) but also through mechanical forces that stimulate O2•- production. Overproduction of O2•- favors the reaction with nitric oxide (•NO) and forms peroxynitrite (ONOO-), a particularly harmful reactive intermediary, since it is able to form hydroxyl radical (•OH) regardless of the presence of transition metal. Among other related phenomena, the diversion of •NO from its vasodilatory function promotes the growth of endothelial cells and vasoconstriction2-13. Oxidative stress can be determined by means of redox balance biomarkers that are quantifiable in biological fluids14.
The main purpose of this study was to quantify some antioxidants and markers of oxidative damage in the blood of a group of hypertensives and controls.
The individuals included in this study are residents of the city of Flexeiras, AL, Brazil, a small city covering an area of 316 square kilometers, with a population of 11,881, located in the Zona da Mata region of the state of Alagoas in northeastern Brazil, 60 kilometers from the state capital, Maceió. Most of the income of Flexeiras comes from the sugarcane monoculture, according to
The participants of this study were selected from a sample of 433 out of the 803 hypertensives registered by the public health teams of the city of Flexeiras in 2005. They represented 53.92% of the hypertensives monitored by the local health service. All of the 433 hypertensives were evaluated from January to June 2005, based on anthropometric data (weight, height, waist circumference), clinical data (arterial pressure levels, diabetes diagnosis, use of medication), biochemical data (fasting glycemia, total cholesterol and triglycerides after 12 hours of fasting), and lifestyle (smoking, lack of exercising). Inclusion criteria were: (1) patients with hypertension1; (2) 40 to 60 years old; (3) not obese, with body mass index (BMI)
A total of 63 non-hypertensive individuals (control group), volunteers, also residents of Flexeiras, signed the informed consent form and were subjected to the same selection criteria.
The protocols complied with the principles of the Declaration of Helsinki and the patients who met the selection criteria were included after reading and signing a written and informed consent form approved by the research ethics committee of the Federal University of Alagoas (UFAL), under process number 009991/2004-79, dated November 20, 2005.
In addition to the aforementioned information, the individuals were surveyed in terms of social class, based on the Brazil Economic Classification criteria of the ABEP (Brazilian Association of Market Research Firms), per capita income and education level.
The individuals selected were instructed to stop using interfering medication such as vitamin and mineral supplements, paracetamol, dexamethasone and alcoholic beverages four weeks prior to drawing blood. During this period, the individuals were contacted systematically through home visits and phone calls to ensure that the preparatory phase was being followed.
After 12 hours of fasting, blood samples were drawn and deposited into vacutainers in 3 aliquots of total blood: (1) 10 mL in heparin for analysis of antioxidant enzymes: superoxide dismutase (SOD), glutathione peroxidase (GPx) and catalase (CAT), glutathione (GSH), all of which in erythrocytes and carbonyl in plasma; (2) 5 mL in EDTA for hemogram; and (3) 5 mL, without anticoagulant, for uric acid, ceruloplasmin (CER), transferrin, malondialdehyde (MDA) and vitamin C readings in serum. Total blood was centrifuged at 3,000 rpm for 5 min. An aliquot of 500
SOD, CAT and GPx activity were determined, respectively, according to the RANDOX-Ransod enzyme kit, the Aebi method, and Paglia and Valentine; GSH according to the Akerboom and Sies method; carbonyl according to the method of Levine; and MDA and vitamin C by HPLC-UV as described by Katepe. CER and transferrin were analyzed with the Spinreact kit. All of the methods used were described by Vasconcelos14.
The statistical analysis initially involved the application of Kolmogorov-Smirnov's test to check the Gaussian distribution. To compare the groups, Student's
Out of the 433 hypertensives, 24 (5.5%) met the selection criteria and 20 (4.6%) completed the protocol. As for the control group, out of the 63 volunteers studied, 21 (33.33%) met the selection criteria and completed the protocol. Therefore, the study was conducted with 20 hypertensives and 21 controls, whose demographic, socioeconomic, anthropometric and biochemical characteristics are listed in
The hypertensives were under antihypertensive therapy and regular users of antihypertensive medication (
Hypertensive individuals presented reduced blood levels of SOD, CAT, GSH, transferrin and MDA and high blood levels of GPx, ascorbate, CER and carbonyl compared to the controls. However, only the blood levels of CAT, GSH and MDA (reduced) and GPx and CER (increased) showed significant differences (
Pearson and Spearman correlation tests had revealed a positive correlation between SBP and MDA (r = 0.44 e p = 0.04) in the study population, and between PAD and CAT (r = 0.54 and p = 0.01) into the controls. Among the biomarkers, a negative correlation was found between MDA and GPx in both groups (r = -0.63 and p = 0.003 in the study population and r = -0.63 and p = 0.004 into the controls).
An epidemiological study found a positive association between increased oxidative stress and reduction of the antioxidant status with cardiovascular risk factors in the general population15,16. Experimental and clinical studies have demonstrated an increase in the production of reactive species in patients with essential hypertension17-36 (
Clinical studies have demonstrated reduced antioxidant enzyme activity among hypertensives compared with controls17,18, but it is not yet clear if this is a cause or a consequence of the hypertensive condition. Thus, oxidative stress in a chronic process such as hypertension could consume the reserves and impair antioxidant enzyme activity.
In view of the above, one would expect to see high levels of oxidative damage and low levels of antioxidants in hypertensives. However, in this study, the hypertensive group showed only lower levels of CAT and GSH antioxidants, higher levels of GPx and CER, and lower levels of the marker of oxidative damage, MDA, in comparison with the control group (
Catalase may be inhibited in the presence of inadequately removed O2•-, generating ferroxycatalase which does not decompose H2O2 rapidly10. This would explain not only the low CAT levels but also the high GPx levels, possibly indicating a greater demand for this enzyme, since it is able to reduce ONOO- efficiently, thus preventing macromolecular oxidation and protein nitration10. Moreover, although no significant differences were found in SOD, one can consider that the reduced levels of this enzyme were probably due to the reaction of O2•- and •NO, which is faster than the reaction of O2•- and SOD, along with the fact that it acts more efficiently in physiological conditions (low concentration of O2•-). Returning to CAT, one can consider that, with O2•-"deviated" to form ONOO-, H2O2 production via SOD is lower or remains at normal levels, not requiring extra activity. Moreover, as mentioned earlier, this enzyme can be inhibited in the presence of accumulated O2•- and its action confined to the cell's peroxisomes.
Concerning drug therapy, the antihypertensive medications that act as antioxidants are: (1) ACE inhibitors and AT1 receptor blockers, which act indirectly by inhibiting the renin-angiotensin-aldosterone system (RAAS), an important source of ROS in the endothelium 3,4,7,8,11; (2) third generation beta-blockers, by increasing the release of •NO and glutathione in the endothelial cell21; and (3) calcium channel blockers, by increasing the availability of nitric oxide in the endothelial cell and increasing the expression of MnSOD in vascular smooth muscle cells22.
In the hypertensive group, the use of an ACE inhibitor (captopril) by 60% of the patients (40% with 25 mg/day and 20% with 50 mg/day) requires additional comments. The antioxidant mechanism of this medication, though indirect and without a defined dose-response relationship, involves inhibition of the RAAS by inhibiting the action of angiotensin II (ANG II), which is the antioxidant link and a potent stimulus for ROS production in the endothelial cell, increasing the NADPH oxidase activity. In addition, ANG II also supra-regulates eNOS activity, which is accompanied by decoupling of the enzyme, reduction of •NO production and increase of superoxide production10. This effect was observed in a study that found an inverse association between f2-isoprostane and number and type of antihypertensive medication: 46% of treated hypertensive patients were using ACE inhibitor and 26%, AT1 receptor blocker23. In addition, the antioxidant action of beta-blockers and AT1 receptor antagonists was also reported in a study of hypertensives treated with these drugs, whose SOD, CAT and GPx levels increased and 8-oxo-2'-deoxyguanosine and MDA levels decreased24. In contrast, another study25 found increased total antioxidant capacity in the plasma of hypertensives using thiazide diuretic, but did not find the same positive correlation with ACE inhibitor and beta-blocker, despite their antioxidant action.
The positive correlation evidenced between SBP and MDA in hypertensives is indicative of the association between HAS and oxidative stress, mainly after the negative relationship obtained between MDA and GPx in both groups.
Because glutathione acts together with GPx, the results were analyzed jointly, considering both of them fundamental in the defense against lipid peroxidation. Each unit of GPx acts by consuming 2 molecules of GSH, which is the most important intracellular antioxidant and is present in the cell predominantly in the reduced form (GSH), to the detriment of the oxidized form (GSSG). The GSH/GSSG > 1 ratio, which is vital for the cell, is maintained by an efficient recycling system of GSH from GSSG10.
In hypertension, low GSH levels and GSH/GSSG <1 ratio have both been found18. In this study, GSSG was not measured. Our findings of low GSH levels are consistent with the literature and would be explained by oxidative stress, since ROS oxidize GSH to GSSG, leading to a drop in GSH, which is worsened by the conversion of GSH into GSSG in the process of peroxide detoxification by the action of GPx.
As for uric acid and vitamin C, the higher levels observed in the hypertensive group were not statistically different, although it is known that hyperuricemia is associated with hypertension28 and the antioxidant activity of urate involves different reactions (with R•, ROO•, ONOO-, and ONO2•)10,14 acting cyclically, since it can be recovered by ascorbate, among others. It is considered a potent plasmatic antioxidant, once its concentration in plasma is tenfold higher than other antioxidants such as vitamins E and C13.
The transferrin levels were similar in the two groups, but the levels of ceruloplasmin, which is also a ferroxidase, were higher in the hypertensive group (
A decrease was observed in the phenomenon of lipid peroxidation (LP) among the hypertensives, since the presence of MDA (the most abundant reactive aldehyde of LP) in the serum of these individuals was lower than in that of the controls (
Several studies have found a positive correlation between high levels of MDA and cardiovascular diseases such as acute myocardial infarction, congestive heart failure and hypertension29-31 in hypertensives without drug therapy18 and in elderly hypertensives using antihypertensive medication32. On the other hand, studies involving hypertensives who have never been treated33 and treated hypertensives23,34 found no differences, among hypertensives and controls, in the levels of F2-isoprostane, another marker of lipid peroxidation, despite the antioxidant action of antihypertensive drugs. However, another study found a positive correlation between this damage marker and inflammation markers in hypertensives not yet under drug therapy35. Patients with class II to class IV congestive heart failure showed reduced levels of MDA36. The results indicate the possible association and LP protection mechanisms, such as GPx and CER, which were found in high levels.
It is worth pointing out that, in the study population, an existing bias was the use of medication. However, antihypertensive drug therapy (especially calcium channel-blocking drugs and ECA inhibitors) produces a significant increase of •NO, but antioxidant enzyme levels remain low when compared with normotensives17. Another interesting aspect is the possibility of CER inhibiting protein oxidation, which was found in an endothelial cell culture through the formation of carbonyl in the presence of ceruloplasmin38.
The phenomenon of oxidative stress, as well as the antioxidant system, works in an integrated fashion, in a series of related events. This characteristic and the complexity of these processes necessarily require a non-compartmentalized discussion. Moreover, one must keep in mind the duality of the redox environment: high antioxidant levels are not necessarily desirable or low antioxidant levels undesirable since both may result in oxidative stress.
Although it is not clear whether oxidative stress in hypertension is a cause or an effect, the occurrence of oxidative stress in hypertension was found in this study, corroborating previously published findings.
The role of oxidative stress in hypertension is already clear and well founded. However, although various studies point to endothelial dysfunction and to the imbalance between the reactive oxygen and nitrogen species and antioxidant defenses, it is not possible to define whether redox imbalance is a cause or a consequence of blood pressure homeostasis. This study revealed oxidative stress in hypertension. Nevertheless, additional studies are needed to elucidate the mechanisms that lead to the genesis of this and other clinical situations characterized by endothelial dysfunction involving redox imbalance. Hence, our research group is currently engaged in studies based on biomarkers of redox imbalance in patients with metabolic syndrome, refractory hypertension and diabetes mellitus, which, like hypertension, are diseases whose common denominator is the endothelial dysfunction.
Lastly, it can be concluded that, with regard to antioxidants and oxidative damage markers, the reduced CAT and GSH levels and high ceruloplasmin levels found in the hypertensive patients indicate that they are under oxidative stress, despite the possible mitigating effect of their antihypertensive medication. High GPx and low MDA levels may also result from oxidative stress, since (1) the enzyme would be in greater demand in the presence of excess ONOO-, a reactive species characteristic of hypertension, and (2) due to its significant action upon ROO•, there would be a decrease in LP, with a consequent reduction of MDA. Hence, the oxidative stress of hypertension, as far as these biomarkers are concerned, would be explained by an alternative mechanism.
The authors are grateful to the patients and volunteers who so willingly participated in this study.
No potential conflict of interest relevant to this article was reported.
This study was funded by FAPEAL, CNPq, CAPES, CAPES/COFECUB, CNPq/PADCT, BNB e FAPEAL/SESAU-AL, MS/DECIT-PPSUS.
This article is parto f the thesis of doctoral submitted by Sandra Mary Lima Vasconcelos, from Universidade Federal de Alagoas and redox analysis of biomarkers in Universidade Federal do Rio Grande do Sul.
1. Sociedade Brasileira de Cardiologia. VI Diretrizes Brasileiras de Hipertensão. Rev Hipertens. 2010;17(1):1-66.
2. Touyz RM. Oxidative stress and vascular damage in hypertension. Curr Hypertens Rep. 2000;2(1):98-105.
3. Griendling KK, Fitzgerald GA Oxidative stress and cardiovascular injury. Part I: basic mechanisms and in vivo monitoring of ROS. Circulation. 2003;108(16):1912-6.
4. Griendling KK, Fitzgerald GA. Oxidative stress and cardiovascular injury. Part II: animal and humans studies. Circulation. 2003;108(17):2034-40.
5. Touyz RM. Reactive oxygen species, vascular oxidative stress, and redox signaling in hypertension. What is the clinical significance? Hypertension. 2004;44(3):248-52.
6. Touyz RM, Schiffrin EL. Reactive oxygen species in vascular biology: implications in hypertension. Histochem Cell Biol. 2004;122(4):339-52.
7. Portaluppi F, Boari B, Manfredini R. Oxidative stress in essencial hypertension. Curr Pharm Design. 2004;10(14):1695-8.
8. Sampaio WO, Santos RAS. Aplicações clínicas dos mecanismos fisiopatológicos da hipertensão arterial. Sistema renina-angiotensina: bases fisiopatológicas. Rev Bras Hipertens. 2004;11:67-70.
9. Paravicini TM, Touyz RM. Redox signaling in hypertension. Cardiovasc Res. 2006;71(2):247-58.
10. Halliwell B, Gutteridge JMC. Free radical in biology and medicine. 4 ed. Oxford: Oxford University Press; 2007.
11. Vasconcelos SML, Goulart MOF, Silva MAM, Gomes ACM. Hipótese oxidativa da hipertensão arterial: uma mini-revisão. Rev Bras Hipertens. 2004;14:269-74.
12. Kuklinska AM, Mroczko B, Muzial WJ, Usowicz-Szarynska M, Borowska H, Knapp M, et al. Diagnostics biomarkers of essential hypertension: the value of prostacyclin, nitric oxide, oxidize-LDL, and peroxide measurements. Int Heart J. 2009;50(3):341-51.
13. Pinho RA, Araujo MC, Ghisi GLM, Benetti M. Doença arterial coronariana, exercício físico e estresse oxidativo. Arq Bras Cardiol. 2010;94(4):549-55.
14. Vasconcelos SML, Goulart MOFG, Moura JBF, Manfredini V, Benfato MS, Kubota LT. Espécies reativas de oxigênio e nitrogênio, antioxidantes e marcadores de estresse oxidativo em sangue humano:principais métodos analíticos para sua determinação. Quim Nova. 2007;30:1323-38.
15. Trevisan M, Brown R, Ram M, Muti P, Freudenheim J, Carosella AM, et al. Correlates of markers of oxidative status in the general population. Am J Epidemiol. 2001;154(4):348-56.
16. Cai H, Harrison DG. Endothelial dysfunction in cardiovascular disease: the role of oxidant stress Circ Res. 2000;87(10):840-4.
17. Khullar J, Relan V, Sherawat BS. Antioxidant activites and oxidative stress byproducts in human hypertension. Hypertension. 2004;43(2):e7-8.
18. Rédon J, Oliva MR, Tormo C, Giner V, Chaves J, Iradi A, et al. Antioxidant activities and oxidative stress byproducts in human hypertension. Hypertension. 2003;41(5):1096-101.
19. Pedro-Botet J, Covas MI, Martin S, Rubies-Prat J. Decrease endogenous antioxidant enzymatic status in essential hypertension. J Hum Hypertens. 2000;14(6):343-5.
20. Ide T, Tsutsui H, Ohashi N, Hayashidani S, Suematsu N, Tsuchihashi M, et al. Greater oxidative stress in healthy young men compared with premenopausal women. Arterioscler Thromb Vasc Biol. 2002;22(3):438-42.
21. Kalinowski L, Dobrucki L, Szczepanska-Konkel W, Jankowiski M, Martyniec L, Angielski S, et al. Third-generation beta-blockers stimulate nitric oxide release from endothelial cells through ATP efflux: a novel mechanism for antihypertensive action. Circulation. 2003;107(21):2747-52.
22. Berkels R, Egink G, Marsen TA, Bartels H, Roesen R, Klaus W. Nifedipine increases endothelial nitric oxide bioavailability by antioxidative mechanisms. Hypertension. 2001;37(2):240-5.
23. Ward NC, Hodgson JM, Puddey IB, Mori TA, Beilin LJ, Croft D. Oxidative stress in human hypertension: association with antihypertensive treatment, gender, nutrition, and lifestyle. Free Radic Biol Med. 2004;36(2):226-32.
24. Sáez GT, Tormos C, Giner V, Chaves J, Lozano JV, Iradi A, et al. Factors related to the impact of antihypertensive treatment in antioxidant activities and oxidative stress by-products in human hypertension. Am J Hypertens. 2004;17(9):809-16.
25. Skalska A, Gasowski J, Stepniewski M, Grodziki T. Antioxidative protection in hypertensive patients treated with diuretics. Am J Hypertens. 2005;18(8):1130-2.
26. Johnson RJ, Rodriguez-Iturbe B, Kang DH, Feig DI, Herrera-Acosta J. A unifying pathway for essential hypertension. Am J Hypertens. 2005;18(3):431-40.
27. Shukla N, Maher J, Masters J, Angelini GD, Jeremy JY. Does oxidative stress change ceruloplasmin from a prospective to a vasculopathic factor? Atherosclerosis. 2006;187(2):238-50.
28. Fox PL, Mazumder B, Ehrenwald E. Ceruloplasmin and cardiovascular disease. Free Radic Biol Med. 2000;28(12):1735-44.
29. Pucheu S, Coudray C, Vanazetto G, Favier A, Machecourt J, De Leiris J. Assessment of radical activity during the acute phase of myocardial infarction following fibrinolysis: utility of assaying plasma malondialdehyde. Free Radic Biol Med. 1995;19(6):873-81.
30. Diaz-Vélez CR, Garcia-Castiñeiras S, Mendoza-Ramos E, Hernández-López E. Increased malondialdehyde in peripheral blood of patients with congestive heart failure. Am Heart J. 1996;131(1):146-52.
31. Ghiadoni L, Magaga A, Versari D, Kardasz I, Huang Y, Taddei S, et al. Different effect of antihypertensive drugs on conduit artery endothelial function. Hypertension. 2003;41(6):1281-6.
32. Kedziora-Kornatowska K, Czuczejko J, Pawluk H, Kornatowski T, Motyl J, Szadujkis-Szadurski L, et al. The markers of oxidative stress and activity of the antioxidant system in the blood of elderly patients with essential arterial hypertension. Cell Mol Biol Lett. 2004;9(4A):635-41.
33. Cracowski JL, Baguet JP, Ormezzano O, Bessard J, Stanke-Labesque F, Bessard G, et al. Lipid peroxidation is not increased in patients with untreated mild-to-moderate hypertension. Hypertension. 2003;41(2):286-8.
34. Minuz P, Patrignani P, Gaino S, Degan M, Menapace L, Tommasoli R, et al. Increased oxidative stress and platelet activation in patients with hypertension and renovascular disease Circulation. 2002;106(22):2800-5.
35. Cottone S, Mulè G, Nardi E, Vadalà A, Guarneri M, Briolotta C, et al. Relation of C-reactive protein to oxidative stress and to endothelial activation in essential hypertension. 36. Sundal S, Sharma M, Negi PC, Katoch SS. Oxidative stress and antioxidant profile in patients of heart failure. Asian J Exp Sci. 2005;19:41-58.
37. Shacter E. Quantification and significance of protein oxidation in biological samples. Drug Metab Rev. 2000;32(3-4):307-26.
38. Krsek-Staples JA, Webster RO. Ceruloplasmin inhibits carbonyl formation in endogenous cell proteins. Free Radic Biol Med. 1993;14(2):115-25.
Sandra Mary Lima Vasconcelos Av. Dr. Hamilton Falcão, 379 - Cond. Chácaras da Lagoa, quadra F, lote 13 - Santa Amélia 57063-250 - Maceió, AL, Brazil E-mail:
Manuscript received June 10, 2010; revised manuscript received December 14, 2010; accepted February 08, 2011.
FUNDAMENTO: Estudios recientes describen la participación de especies reactivas de oxígeno y nitrógeno en la hipertensión. OBJETIVO: Identificar el desequilíbrio redox em la sangre de los hipertensos MÉTODOS: El Superóxido dismutasa (SOD), catalasa (CAT), glutationa peroxidasa (GPx), glutationa (GSH), vitamina C, transferrina, ceruloplasmina, malondialdehído (MDA) y el grupo carbonilo, fueron cuantificados en la sangre de 20 hipertensos y 21 controles. Los individuos tenían un Índice de Masa Corporal de > 18,5 y < 30 kg/m², glicemia < 100 mg/dL, colesterol sérico < 200 mg/dL, y eran mujeres no fumadoras, no grávidas y no lactantes, no usuarias de alopurinol y probucol, con hipertensos sometidos a medicación antihipertensiva. Todos los individuos fueron sometidos a un período preparatorio de cuatro semanas sin alcohol, suplementos vitamínicos, dexametasona y paracetamol. RESULTADOS: Niveles reducidos de CAT (p = 0,013), GSH (p = 0,003) y MDA (p = 0,014), y altos niveles de GPx (p = 0,001) y ceruloplasmina (p = 0,015) fueron obtenidos en el grupo de hipertensos, en comparación con los controles. Fue obtenida una correlación positiva entre la presión sistólica y el MDA en la presión de hipertensos y diastólica y CAT en los controles. CONCLUSIÓN: Los datos obtenidos son sugestivos de que los hipertensos presentaban desequilibrio en reacciones de reducción y oxidación, a despecho del posible efecto atenuante de su medicación antihipertensiva.
IUniversidade Federal de Alagoas-UFAL; Porto Alegre, RS-Brasil
IIInstituto de Química e Biotecnologia-IQB; Porto Alegre, RS-Brasil
IIIInstituto de Ciências Biológicas e da Saúde-ICBS; Porto Alegre, RS-Brasil
IVFaculdade de Nutrição-FANUT; Porto Alegre, RS-Brasil
VFaculdade de Medicina-FAMED; Porto Alegre, RS-Brasil
VIMaceió, AL-Brasil. Universidade Federal do Rio Grande do Sul-UFRGS; Porto Alegre, RS-Brasil
La hipertensión viene siendo objeto de muchos estudios, en razón de la alta prevalencia y del gran impacto en la morbimortalidad: levantamientos poblacionales realizados en varias ciudades brasileñas indican su prevalencia en 22,3% a 43,9%1.
Entre los factores asociados al desarrollo de la hipertensión, una cuestión extremamente importante, compleja y actual es la participación de especies reactivas de oxígeno (ERO) y de especies reactivas de nitrógeno (ERN) en su patogénesis. De esa forma, la hipótesis oxidativa de hipertensión se basa en el hecho de que el endotelio vascular, el órgano central para la hipertensión, es el lugar donde ocurren numerosos procesos de reducción y oxidación, especialmente por medio de las enzimas NAD(P) H oxidasa (P), xantina oxidasa (XO) y del óxido nítrico sintasa endotelial (eNOS), que actúan aumentando la producción de anión radical superóxido (O2 •-), pero también por medio de fuerzas mecánicas que estimulan la producción de O2 •-. La producción excesiva de O2 •-favorece la reacción con el óxido nítrico (•NO) y forma el peroxinitrito (ONOO -), un intermediario reactivo particularmente peligroso, una vez que es capaz de formar el radical oxihidrilo (•OH), independientemente de la presencia de metales de transición. Entre otros fenómenos asociados, el desvío del •NO de su función vasodilatadora promueve el crecimiento de células endoteliales y de la vasoconstricción2-13 . El estrés oxidativo puede ser determinado por medio de biomarcadores del equilibrio de reacciones de oxidación y reducción, que son cuantificables en fluidos biológicos14 .
El principal objetivo de este estudio fue cuantificar algunos antioxidantes y marcadores de daño oxidativo en la sangre de un grupo de hipertensos y controles.
Los individuos incluidos en el estudio eran residentes del municipio de Flexeiras, Alagoas (AL), Brasil, un pequeño municipio con un área de 316 kilómetros cuadrados, con una población de 11.881 habitantes, localizado en la región de la Zona de la Selva del Estado de Alagoas, en el Noreste del Brasil, a 60 kilómetros de distancia de la capital del Estado, Maceió. La principal fuente de ingresos de Flexeiras viene del la monocultivo de la caña de azúcar, de acuerdo con el IBGE (http://www.ibge.org.br).
Los participantes de este estudio fueron seleccionados de una muestra de 433 de los 803 hipertensos registrados por los equipos de salud de la familia del municipio de Flexeiras en 2005. Representaban 53,92% de los hipertensos con seguimiento por la salud pública local. Los 433 hipertensos fueron evaluados de enero a junio de 2005, con base en datos antropométricos (peso, altura, circunferencia de la cintura), datos clínicos (niveles de presión arterial, diagnóstico de diabetes, uso de medicamentos), datos bioquímicos (glicemia en ayuno, colesterol total y triglicéridos, después de 12 horas de ayuno), y estilo de vida (tabaco, sedentarismo). Los criterios de fueron fueron: (1) pacientes con hipertensión1; (2) 40 a 60 años; (3) no obesos, con Índice de Masa Corporal (IMC)
Sesenta y tres individuos no hipertensos (grupo control), voluntarios, también moradores de Flexeiras, firmaron el formulario de consentimiento libre y aclarado y fueron sometidos a los mismos criterios de selección.
Los protocolos adhirieron a los principios de la Declaración de Helsinki y los pacientes que estaban en conformidad con los criterios de selección fueron incluidos después de lectura y firma del formularios de consentimiento libre y aclarado aprobado por el Comité de Ética en investigación de la Universidad Federal de Alagoas (UFAL), en proceso nº 009991/2004-79, de 20 de noviembre de 2005.
Además de las informaciones citadas, hubo levantamiento de los individuos con relación a la clase social, con base en los Criterios de Clasificación Económica Brasil de la Asociación Brasileña de Empresas de Investigación de Mercado (ABEP), renta
Los individuos seleccionados fueron orientados a interrumpir el uso de medicación interferente, como suplementos vitamínicos y minerales, paracetamol, dexametasona y bebidas alcohólicas cuatro semanas antes de la colecta de la sangre. Durante ese período, los individuos fueron contactados sistemáticamente por medio de visitas domiciliarias y telefónicamente para garantizar que la fase preparatoria estaba siendo seguida.
El análisis estadístico envolvió inicialmente la aplicación del test de Kolmogorov-Smirnov para verificar la distribución Gaussiana. Para comparar los grupos, el test
De los 433 hipertensos, 24 (5,5%) estaban en conformidad con los criterios de selección y 20 (4,6%) concluyeron el protocolo. En lo que toca al grupo de control, de los 63 voluntarios estudiados, 21 (33,33%) estaban en conformidad con los criterios de selección y concluyeron el protocolo. Por lo tanto, el estudio fue conducido con 20 hipertensos y 21 controles, cuyas características demográficas, socioeconómicas, antropométricas y bioquímicas fueron relatadas en la
Los hipertensos eran sometidos a la terapia antihipertensiva y eran usuarios regulares de medicación antihipertensiva (
Los individuos hipertensos presentaron niveles disminuidos de SOD, CAT, GSH, transferrina y MDA en la sangre y niveles elevados de GPx, ascorbato, CER y carbonilo en la sangre, cuando fueron comparados a los controles. Mientras tanto, apenas de los niveles de CAT, GSH y MDA en sangre (disminuidos) y de GPx y CER (aumentados) presentaron diferencias significativas (
Los tests de correlación de Pearson y Spearman revelaron una correlación positiva entre PAS y MDA (r = 0,44 y p = 0,04) en la población estudiada, y entre PAD y CAT (r = 0,54 y p = 0,01) en los controles. Entre los biomarcadores, una correlación negativa fue verificada entre MDA y GPx en los dos grupos (r = -0,63 y p = 0,003 en los hipertensos y r = -0,63 y p = 0,004 en los controles).
Un estudio epidemiológico constató una asociación positiva entre el estrés oxidativo aumentado y la reducción del
Estudios clínicos demostraron una actividad de enzimas antioxidantes disminuida entre hipertensos cuando fue comparada a los controles17,18, pero aun no está claro si esa es una causa o una consecuencia de la condición hipertensiva. Así, el estrés oxidativo en un proceso crónico como la hipertensión podría consumir las reservas y perjudicar la actividad de enzimas antioxidantes.
En vista de lo que discutimos anteriormente, es posible prever niveles altos de daño oxidativo y niveles bajos de antioxidantes en hipertensos. Mientras tanto, en el presente estudio, el grupo de hipertensos presentó niveles más bajos apenas de los antioxidantes CAT y GSH, niveles más altos de GPx y CER, y niveles más bajos del marcador de daño oxidativo, MDA, en comparación con el grupo de control (
La catalasa puede ser inhibida en la presencia de O2 •-removido inadecuadamente, generando ferroxicatalasa, que no descompone H2O2 rápidamente10. Eso explicaría no sólo los niveles de CAT bajos, sino también los niveles de GPx altos, posiblemente indicando una mayor demanda de esa enzima, una vez que es capaz de reducir ONOO-de manera eficiente, impidiendo, así, la oxidación de cadenas macromoleculares y la nitración de proteínas10. Además de eso, aunque no hayan sido constatadas diferencias significativas en la SOD, es posible considerar que los niveles reducidos de esa enzima eran probablemente debidos a la reacción de O2 •-y •NO, que es más rápida que la reacción de O2 •-y SOD, además del hecho de que ellaactúa de manera más eficiente encondiciones fisiológicas (baja concentración de O2 •-). Retornando a la CAT, se puede considerar que, con O2 •-"desviado" para formar ONOO-, la producción de H2O2 por medio del SOD es menor o permanece en niveles normales, no exigiendo una actividad adicional. Además de eso, según fue mencionado anteriormente, esa enzima puede ser inhibida en la presencia de O2 •-acumulado y su acción confinada a los peroxisomos de las células.
Con relación a la terapia farmacológica, las medicaciones antihipertensivas que actuaban como antioxidantes eran: (1) inhibidores de ACE y bloqueadores de receptores de AT1, que actúan indirectamente por la inhibición del sistema reninaangiotensina-aldosterona (SRAA), una importante fuente de ERO en el endotelio3,4,7,8,11; (2) betabloqueantes de tercera generación, por medio del aumento de la liberación de •NO y glutationa en la célula endotelial21; y (3) bloqueadores de los canales de calcio, con el aumento de la disponibilidad de óxido nítrico en la célula endotelial y aumento de la expresión de MnSOD en las células musculares lisas vasculares22.
En el grupo de hipertensos, el uso de un inhibidor de ACE (captopril) en 60% de los pacientes (40% con 25 mg/ día y 20% con 50 mg/día) exige comentarios adicionales. El mecanismo antioxidante de esa medicación, aunque indirecto y sin una relación dosaje-respuesta definida, envuelve la inhibición del RAAS por medio de la inhibición de la acción de la angiotensina II (ANG II), que corresponde a una ligación antioxidante y un potente estímulo para la producción de ROS en la célula endotelial, que es la ligación antioxidante y corresponde a un potente estímulo para la producción de ERO en la célula endotelial, aumentando la actividad de la oxidasa de NADPH. Además de eso, la ANG II también suprarregula la actividad del eNOS, que es acompañada por la separación de la enzima, la reducción de la producción de •NO y el aumento de la producción de superóxido10. Ese efecto fue verificado en un estudio que encontró una asociación inversa entre el F2isoprostano y el número y tipo de medicación antihipertensiva [en la cual 46% correspondía al inhibidor de ACE tratado y 26%, a un bloqueador de receptor de angiotensina-1 (AT1)],23 . Además de eso, la acción antioxidante de betabloqueantes y antagonistas de receptores de AT1 también fue relatada en un estudio de hipertensos tratados con esos medicamentos, cuyos niveles de SOD, CAT y GPx aumentan y los niveles de 8-oxo-2'-desoxiguanosina y MDA reducen24. En contraste, otro estudo25 constató una capacidad antioxidante aumentada en el plasma de hipertensos utilizando diuréticos tiazídicos, pero no constató la misma correlación positiva con el inhibidor de ACE y el betabloqueante, a despecho de su acción antioxidante.
La correlación positiva evidenciada entre PAS y MDA en hipertensos es indicativa de la asociación entre la HAS y el estrés oxidativo, especialmente después de la relación negativa obtenida entre MDA y GPx en los dos grupos.
Como la glutationa actúa en conjunto con la GPx, los resultados fueron analizados en conjunto, considerando los dos fundamentales en la defensa contra la peroxidación lipídica. Cada unidad de GPx actúa por medio del consumo de dos moléculas de GSH, que es el antioxidante intracelular más importante y está presente en la célula predominantemente en la forma reducida (GSH), en detrimento de la forma oxidada (GSSG). La razón GSH/GSSG > 1, que es vital para la célula, es mantenida por un sistema de reciclado eficiente de GSH a partir de GSSG10.
En la hipertensión, fueron encontrados bajos niveles de GSH y la razón de GSH/GSSG <118. En este estudio, la GSSG no fue medida. Nuestros resultados de niveles bajos de GSH son coherentes con la literatura y serían explicados por el estrés oxidativo, una vez que la ERO oxida la GSH en GSSG, llevando a una caída en la GSH, lo que es agravado por la conversión de la GSH en GSSG en el proceso de desintoxicación del peróxido, por la acción de la GPx.
Con relación al ácido úrico y a la vitamina C, los niveles más elevados observados en el grupo de hipertensos no fueron estadísticamente diferentes, aunque se sepa que la hiperuricemia está asociada con la hipertensión28 y la actividad antioxidante del urato envuelve diferentes reacciones (con R•, ROO•, ONOO-, y ONO2 •)10,14 actuando de forma cíclica, una vez que puede ser recuperado por el ascorbato, entre otros. Además, es considerado un antioxidante plasmático potente, una vez que su concentración en el plasma es diez veces mayor que otros antioxidantes, como las vitaminas E y C13.
Los niveles de transferrina fueron semejantes en los dos grupos, pero los niveles de ceruloplasmina, que también es una ferroxidasa, fueron mayores en el grupo de hipertensos (
Fue observada una disminución en el fenómeno de la peroxidación lipídica (LP) entre los hipertensos, ya que la presencia del MDA (el aldehído reactivo más abundante de LP) en el suero de esos individuos era menor que en el suero de los controles (
Diversos estudios constataron una correlación positiva entre niveles elevados de MDA y las enfermedades cardiovasculares, como el infarto agudo de miocardio, la insuficiencia cardíaca congestiva y la hipertensión29-31 en hipertensos sin terapia farmacológica18 y en hipertensos añosos utilizando medicación antihipertensiva32 . A su vez, estudios envolviendo hipertensos que nunca fueron tratados33 e hipertensos tratados23,34 no constataron diferencias entre hipertensos y controles en los niveles de F2-isoprostano, otro marcador de peroxidación lipídica, a despecho de la acción antioxidante de los medicamentos antihipertensivos. Mientras tanto, otro estudio encontró una correlación positiva entre ese marcador de daño y marcadores de inflamación en hipertensos aun no sometidos a la terapia farmacológica35. Los pacientes con insuficiencia cardíaca congestiva de clase II a clase IV mostraron niveles disminuidos de MDA36. Los resultados indican la posible asociación entre mecanismos de proteína de LP, tales como GPx y CER, que fueron encontrados en niveles elevados.
Es importante resaltar que, en la población del estudio, un sesgo existente era el uso de medicación. Entre tanto, la terapia farmacológica antihipertensiva (en especial medicaciones bloqueadoras de canales de calcio e inhibidores de la ECA) produce un aumento significativo del •NO, pero los niveles de enzimas antioxidantes permanecen bajos cuando son comparados a normotensos17. Otro aspecto significativo es la posibilidad de que el CER de inhiba la oxidación de proteínas, lo que fue verificado en un cultivo de células endoteliales, por medio de la formación de carbonilo en la presencia de ceruloplasmina38.
El fenómeno del estrés oxidativo, así como el sistema antioxidante funcionan de forma integrada, con una serie de eventos relacionados. Esa característica y la complejidad de esos procesos necesariamente exigen una discusión no individualizada. Además de eso, es preciso tener en mente la dualidad del ambiente de reacciones de oxidación y reducción: niveles elevados de antioxidantes no son necesariamente deseables, y niveles bajos de antioxidantes, indeseables, una vez que los dos pueden resultar en estrés oxidativo.
Aunque no sea claro si el estrés oxidativo en la hipertensión es una causa o un efecto, la ocurrencia de estrés oxidativo en la hipertensión fue verificada en este estudio, corroborando las constataciones publicadas anteriormente.
La función del estrés oxidativo en la hipertensión ya está clara y bien fundamentada. Mientras tanto, aunque varios estudios señalen hacia la disfunción endotelial y el desequilibrio entre las especies reactivas de oxígeno y nitrógeno y a las defensas antioxidantes, no es posible definir si el desequilibrio en reacciones de reducción y oxidación es una causa o una consecuencia de la homeostasis de la presión arterial. Este estudio reveló estrés oxidativo en la hipertensión. No obstante, son necesarios estudios adicionales para elucidar los mecanismos que llevan su génesis y de otras situaciones clínicas caracterizadas por disfunción endotelial envolviendo desequilibrio en reacciones de reducción y oxidación. De ese modo, nuestro grupo de investigación está actualmente desarrollando estudios sobre los biomarcadores del desequilibrio en reacciones de reducción y oxidación en pacientes con síndrome metabólica, hipertensión refractaria y diabetes mellitus que, como la hipertensión, son enfermedades cuyo denominador común es la disfunción endotelial.
Por fin, se puede concluir que, con relación a antioxidantes y marcadores de daño oxidativo, los niveles de CAT y GSH disminuidos y los niveles elevados de ceruloplasmina encontrados en pacientes hipertensos indican que ellos se encuentran en estrés oxidativo, a despecho del posible efecto atenuante de su medicación antihipertensiva. Niveles altos de GPx y MDA también pueden surgir del estrés oxidativo, una vez que (1) la enzima estaría sujeta a una mayor demanda en la presencia de ONOO¯ en exceso, una especie reactiva característica de la hipertensión, y (2) debido a su acción significativa en el ROO-, habría una disminución en la LP, con la consecuente reducción de MDA. Así, el estrés oxidativo de la hipertensión, en lo que concierne a esos biomarcadores, sería explicado por un mecanismo alternativo.
Los autores agradecen a los pacientes y voluntarios que participaron de este estudio de manera tan útil.
Declaro no haber conflicto de intereses pertinentes.
FAPEAL, CNPq, CAPES, CAPES/COFECUB, CNPq/PADCT, BNB e FAPEAL/SESAU-AL, MS/DECIT-PPSUS financiaron el presente estudio.
Este artículo es parte de tesis de Doctorado de Sandra Mary Lima Vasconcelos por la Universidade Federal de Alagoas con análisis de biomarcadores redox en asociación con la Universidade Federal de Rio Grande do Sul.
1. Sociedade Brasileira de Cardiologia. VI Diretrizes Brasileiras de Hipertensão. Rev Hipertens. 2010;17(1):1-66.
2. Touyz RM. Oxidative stress and vascular damage in hypertension. Curr Hypertens Rep. 2000;2(1):98-105.
3. Griendling KK, Fitzgerald GA Oxidative stress and cardiovascular injury. Part I: basic mechanisms and in vivo monitoring of ROS. Circulation. 2003;108(16):1912-6.
4. Griendling KK, Fitzgerald GA. Oxidative stress and cardiovascular injury. Part II: animal and humans studies. Circulation. 2003;108(17):2034-40.
5. Touyz RM. Reactive oxygen species, vascular oxidative stress, and redox signaling in hypertension. What is the clinical significance? Hypertension. 2004;44(3):248-52.
6. Touyz RM, Schiffrin EL. Reactive oxygen species in vascular biology: implications in hypertension. Histochem Cell Biol. 2004;122(4):339-52.
7. Portaluppi F, Boari B, Manfredini R. Oxidative stress in essencial hypertension. Curr Pharm Design. 2004;10(14):1695-8.
8. Sampaio WO, Santos RAS. Aplicações clínicas dos mecanismos fisiopatológicos da hipertensão arterial. Sistema renina-angiotensina: bases fisiopatológicas. Rev Bras Hipertens. 2004;11:67-70.
9. Paravicini TM, Touyz RM. Redox signaling in hypertension. Cardiovasc Res. 2006;71(2):247-58.
10. Halliwell B, Gutteridge JMC. Free radical in biology and medicine. 4 ed. Oxford: Oxford University Press; 2007.
11. Vasconcelos SML, Goulart MOF, Silva MAM, Gomes ACM. Hipótese oxidativa da hipertensão arterial: uma mini-revisão. Rev Bras Hipertens. 2004;14:269-74.
12. Kuklinska AM, Mroczko B, Muzial WJ, Usowicz-Szarynska M, Borowska H, Knapp M, et al. Diagnostics biomarkers of essential hypertension: the value of prostacyclin, nitric oxide, oxidize-LDL, and peroxide measurements. Int Heart J. 2009;50(3):341-51.
13. Pinho RA, Araujo MC, Ghisi GLM, Benetti M. Doença arterial coronariana, exercício físico e estresse oxidativo. Arq Bras Cardiol. 2010;94(4):549-55.
14. Vasconcelos SML, Goulart MOFG, Moura JBF, Manfredini V, Benfato MS, Kubota LT. Espécies reativas de oxigênio e nitrogênio, antioxidantes e marcadores de estresse oxidativo em sangue humano:principais métodos analíticos para sua determinação. Quim Nova. 2007;30:1323-38.
15. Trevisan M, Brown R, Ram M, Muti P, Freudenheim J, Carosella AM, et al. Correlates of markers of oxidative status in the general population. Am J Epidemiol. 2001;154(4):348-56.
16. Cai H, Harrison DG. Endothelial dysfunction in cardiovascular disease: the role of oxidant stress Circ Res. 2000;87(10):840-4.
17. Khullar J, Relan V, Sherawat BS. Antioxidant activites and oxidative stress byproducts in human hypertension. Hypertension. 2004;43(2):e7-8.
18. Rédon J, Oliva MR, Tormo C, Giner V, Chaves J, Iradi A, et al. Antioxidant activities and oxidative stress byproducts in human hypertension. Hypertension. 2003;41(5):1096-101.
19. Pedro-Botet J, Covas MI, Martin S, Rubies-Prat J. Decrease endogenous antioxidant enzymatic status in essential hypertension. J Hum Hypertens. 2000;14(6):343-5.
20. Ide T, Tsutsui H, Ohashi N, Hayashidani S, Suematsu N, Tsuchihashi M, et al. Greater oxidative stress in healthy young men compared with premenopausal women. Arterioscler Thromb Vasc Biol. 2002;22(3):438-42.
21. Kalinowski L, Dobrucki L, Szczepanska-Konkel W, Jankowiski M, Martyniec L, Angielski S, et al. Third-generation beta-blockers stimulate nitric oxide release from endothelial cells through ATP efflux: a novel mechanism for antihypertensive action. Circulation. 2003;107(21):2747-52.
22. Berkels R, Egink G, Marsen TA, Bartels H, Roesen R, Klaus W. Nifedipine increases endothelial nitric oxide bioavailability by antioxidative mechanisms. Hypertension. 2001;37(2):240-5.
23. Ward NC, Hodgson JM, Puddey IB, Mori TA, Beilin LJ, Croft D. Oxidative stress in human hypertension: association with antihypertensive treatment, gender, nutrition, and lifestyle. Free Radic Biol Med. 2004;36(2):226-32.
24. Sáez GT, Tormos C, Giner V, Chaves J, Lozano JV, Iradi A, et al. Factors related to the impact of antihypertensive treatment in antioxidant activities and oxidative stress by-products in human hypertension. Am J Hypertens. 2004;17(9):809-16.
25. Skalska A, Gasowski J, Stepniewski M, Grodziki T. Antioxidative protection in hypertensive patients treated with diuretics. Am J Hypertens. 2005;18(8):1130-2.
26. Johnson RJ, Rodriguez-Iturbe B, Kang DH, Feig DI, Herrera-Acosta J. A unifying pathway for essential hypertension. Am J Hypertens. 2005;18(3):431-40.
27. Shukla N, Maher J, Masters J, Angelini GD, Jeremy JY. Does oxidative stress change ceruloplasmin from a prospective to a vasculopathic factor? Atherosclerosis. 2006;187(2):238-50.
28. Fox PL, Mazumder B, Ehrenwald E. Ceruloplasmin and cardiovascular disease. Free Radic Biol Med. 2000;28(12):1735-44.
29. Pucheu S, Coudray C, Vanazetto G, Favier A, Machecourt J, De Leiris J. Assessment of radical activity during the acute phase of myocardial infarction following fibrinolysis: utility of assaying plasma malondialdehyde. Free Radic Biol Med. 1995;19(6):873-81.
30. Diaz-Vélez CR, Garcia-Castiñeiras S, Mendoza-Ramos E, Hernández-López E. Increased malondialdehyde in peripheral blood of patients with congestive heart failure. Am Heart J. 1996;131(1):146-52.
31. Ghiadoni L, Magaga A, Versari D, Kardasz I, Huang Y, Taddei S, et al. Different effect of antihypertensive drugs on conduit artery endothelial function. Hypertension. 2003;41(6):1281-6.
32. Kedziora-Kornatowska K, Czuczejko J, Pawluk H, Kornatowski T, Motyl J, Szadujkis-Szadurski L, et al. The markers of oxidative stress and activity of the antioxidant system in the blood of elderly patients with essential arterial hypertension. Cell Mol Biol Lett. 2004;9(4A):635-41.
33. Cracowski JL, Baguet JP, Ormezzano O, Bessard J, Stanke-Labesque F, Bessard G, et al. Lipid peroxidation is not increased in patients with untreated mild-to-moderate hypertension. Hypertension. 2003;41(2):286-8.
34. Minuz P, Patrignani P, Gaino S, Degan M, Menapace L, Tommasoli R, et al. Increased oxidative stress and platelet activation in patients with hypertension and renovascular disease Circulation. 2002;106(22):2800-5.
35. Cottone S, Mulè G, Nardi E, Vadalà A, Guarneri M, Briolotta C, et al. Relation of C-reactive protein to oxidative stress and to endothelial activation in essential hypertension. 36. Sundal S, Sharma M, Negi PC, Katoch SS. Oxidative stress and antioxidant profile in patients of heart failure. Asian J Exp Sci. 2005;19:41-58.
37. Shacter E. Quantification and significance of protein oxidation in biological samples. Drug Metab Rev. 2000;32(3-4):307-26.
38. Krsek-Staples JA, Webster RO. Ceruloplasmin inhibits carbonyl formation in endogenous cell proteins. Free Radic Biol Med. 1993;14(2):115-25.
Sandra Mary Lima Vasconcelos Av. Dr. Hamilton Falcão, 379 - Cond. Chácaras da Lagoa, quadra F, lote 13 - Santa Amélia 57063-250 - Maceió, AL, Brasil E-mail:
Artículo recibido el 10/06/10; revisado recibido el 14/12/10; aceptado el 08/02/11.