Arq Bras CardiolabcArquivos Brasileiros de CardiologiaArq. Bras. Cardiol.0066-782X1678-4170Sociedade Brasileira de Cardiologia - SBCP5S4TCBCd3tmLkKgg3ZL48GS0066-782X201700140043210.5935/abc.20170151S0066-782X2017005020103Original ArticlesCardiac, Metabolic and Molecular Profiles of Sedentary Rats in the Initial Moment of ObesityJacobsenBruno Barcellos1LeopoldoAna Paula Lima1CordeiroJóctan Pimentel1CamposDijon Henrique Salomé de2NascimentoAndré Ferreira do3SugizakiMário Mateus3CicognaAntônio Carlos2PadovaniCarlos Roberto2LeopoldoAndré Soares1Universidade Federal do Espírito SantoVitóriaESBrazilUniversidade Federal do Espírito Santo (UFES), Vitória, ES - BrazilUniversidade Federal do Espírito SantoFaculdade de Medicina - UNESPDepartamento de Clínica MédicaBotucatuSPBrazilDepartamento de Clínica Médica - Faculdade de Medicina - UNESP, Botucatu, SP - BrazilUniversidade Federal de Mato GrossoSINOPMTBrazilUniversidade Federal de Mato Grosso (UFMT), SINOP, MT - BrazilUniversidade Federal de Mato GrossoMailing Address: André Soares Leopoldo, Avenida Fernando Ferrari, 514, CEP 29075-410, Goiabeiras, Vitória, ES - Brazil. E-mail: andresoaresleopoldo@gmail.com, andre.leopoldo@ufes.br
Author contributions
Conception and design of the research: Jacobsen BB, Cicogna AC, Leopoldo APL, Leopoldo AS; Acquisition of data: Jacobsen BB, Cordeiro JP, Campos DHS, Nascimento AF, Sugizaki MM, Cicogna AC; Analysis and interpretation of the data and Critical revision of the manuscript for intellectual content: Jacobsen BB, Cordeiro JP, Campos DHS, Nascimento AF, Sugizaki MM, Cicogna AC, Padovani CR, Leopoldo APL, Leopoldo AS; Statistical analysis: Cicogna AC, Padovani CR; Obtaining financing: Cicogna AC, Leopoldo APL, Leopoldo AS; Writing of the manuscript: Jacobsen BB, Sugizaki MM, Cicogna AC, Padovani CR, Leopoldo APL, Leopoldo AS.
Potential Conflict of Interest
No potential conflict of interest relevant to this article was reported.
191020171120171095432439211120162804201728042017This is an Open Access article distributed under the terms of the Creative Commons Attribution License, which permits unrestricted use, distribution, and reproduction in any medium, provided the original work is properly cited.AbstractBackground:
Different types of high-fat and/or high-energy diets have been used to induce obesity in rodents. However, few studies have reported on the effects observed at the initial stage of obesity induced by high-fat feeding on cardiac functional and structural remodelling.
Objective:
To characterize the initial moment of obesity and investigate both metabolic and cardiac parameters. In addition, the role of Ca2+ handling in short-term exposure to obesity was verified.
Methods:
Thirty-day-old male Wistar rats were randomized into two groups (n = 19 each): control (C; standard diet) and high-fat diet (HF, unsaturated high-fat diet). The initial moment of obesity was defined by weekly measurement of body weight (BW) complemented by adiposity index (AI). Cardiac remodelling was assessed by morphological, histological, echocardiographic and papillary muscle analysis. Ca2+ handling proteins were determined by Western Blot.
Results:
The initial moment of obesity occurred at the 3rd week. Compared with C rats, the HF rats had higher final BW (4%), body fat (20%), AI (14.5%), insulin levels (39.7%), leptin (62.4%) and low-density lipoprotein cholesterol (15.5%) but did not exhibit alterations in systolic blood pressure. Echocardiographic evaluation did not show alterations in cardiac parameters. In the HF group, muscles were observed to increase their +dT/dt (C: 52.6 ± 9.0 g/mm2/s and HF: 68.0 ± 17.0 g/mm2/s; p < 0.05). In addition, there was no changes in the cardiac expression of Ca2+ handling proteins.
Conclusion:
The initial moment of obesity promotes alterations to hormonal and lipid profiles without cardiac damage or changes in Ca2+ handling.
Obesity is considered a major syndrome of the XXI century and has reached epidemic proportions worldwide in recent decades.1,2 According to the World Health Organization, the number of overweight individuals has reached over a billion people, and more than 30% of this population is obese.3 Obesity is a complex disease, and while some authors have suggested that genetic factors contribute its development,4 most research emphasizes that major causes of obesity are the so-called exogenous factors, especially the consumption of highly available, palatable food, and lack of exercise.2,5
A number of different types of high-fat and/or high-energy diets have been used to induce obesity and mimic human metabolic syndrome in rodents.6-11 However, few studies have investigated the initial stage of obesity induced by a high-fat diet. Researchers have observed the initial moment of obesity in animals fed a high-fat diet after 4 weeks of treatment.12-15 However, molecular and cardiac parameters in this initial stage were not presented.
Studies have shown that excess body fat leads to several cardiovascular abnormalities that correlate with the duration and intensity of obesity in humans and in animal models.16-20 Thus, it becomes necessary to identify the duration and intensity of damage in the early period of the disease. Furthermore, it is important to verify the mechanisms involved in this process, since studies have shown that abnormalities in Ca2+ handling may be responsible for the development of cardiac dysfunction in obesity models induced by a high-fat diet.
Due to the lack of studies, our purpose was to characterize the initial moment of obesity and investigate both the metabolic and cardiac parameters in obese rats. In addition, the role of Ca2+ handling in short-term exposure to obesity was evaluated.
MethodsAnimal Care
All experiments and procedures were performed in accordance with the Guide for the Care and Use of Laboratory Animals published by the U.S. National Institutes of Health and approved by the Botucatu Medical School Ethics Committee (UNESP, Botucatu, SP, Brazil) (approval numberFMB-PE-5/2009).
Thirty-day-old male Wistar rats were distributed into two groups: control (C, n = 19) and high-fat diet (HF, n = 19). Group C was fed a standard diet containing 12.3% of its energy from fat, 57.9% from carbohydrate, and 29.8% from protein.The HF animals were fed four high-fat diets (RC Focus 2413, 2414, 2415, and 2416) that differed in their flavouring but not in their micro- and macronutrients. The high-fat diets contained 49.2% of their energy from fat, 28.9% from carbohydrates, and 21.9% from protein as previously described.17 All rats were housed in individual cages in an environmentally controlled, clean-air room at 23 ± 3°C with a 12-h light/dark cycle (lights on at 6am) and 60 ± 5% relative humidity. After starting the experimental protocol, food consumption (FC), energy intake (EI), feed efficiency (FE), and body weight (BW) were recorded weekly. EI was calculated as follows: EI = average weekly EI multiplied by the caloric value of each diet (C or HF). FE (%) is the ability to convert EI to BW and was determined as the mean BW gain (g)/total calorie intake (kcal) x100.
Characterization of the Initial Moment of Obesity
After starting the experimental protocol, BW was recorded once a weekto characterize the initial moment of obesity. When C and HF groups presented a significant difference in BW, the animals were anesthetized by ketamine injection (50 mg/kg) and xylazine (0.5 mg/kg) intraperitoneal (IP) injection, decapitated, and thoracotomized, and the fat pads were dissected and weighed. The initial moment of obesity was defined by BW (g) measurements that were recorded weekly and complemented by post-mortem adiposity index (AI) using the following formula: AI = [body fat (BF)/ BW] x 100. BF (g) was measured from the sum of the individual fat pad weights: epididymal fat + retroperitoneal fat + visceral fat.
Systolic blood pressure
The systolic blood pressure (SBP) of the tail was measured one week before euthanasia with a tail plethysmograph. The animals were warmed in a wooden box at 40°C with heat generated for four minutes to cause vasodilation of the tail artery, and the animals were then transferred to an iron cylindrical support. A sensor was placed in the proximal region of the tail and coupled to an electro-sphygmomanometer (NarcoBioSystem, International Biomedical Inc, TX, USA). The electro-sphygmomanometer was attached to a computer,and SBP was measured using the Biopac software (Biopac Systems Inc., CA, USA).
Insulin tolerance test (ITT)
Blood samples were drawn from the tip of the tail at basal condition and after the intraperitoneal administration of regular insulin (Novolin2 R, Novo Nordisk, Bagsvaerd, Denmark) at a dose of 1.5 IU/kg body weight.21 Blood glucose was then collected at 0 (basal), 5, 10, 15, 20, 25 and 30 min. Glucose levels were determined using a handheld glucometer (Accu-ChekAdvantage; Roche Diagnostics Co., Indianapolis, USA). Insulin resistance was determined from the area under the curve for glucose (AUC; 0-30 minutes).
Echocardiographic evaluation
One week before euthanasia, echocardiographic evaluation was performed using a commercially available echocardiograph (Philips HDI-5000), and left ventricular (LV) structural variables were evaluated as previously described.22
Metabolic and hormonal profile
Blood samples were collected, and the serum was separated by centrifugation at 3,000 × g for 15 minutes at 4°C. Glucose, total cholesterol (T-Chol), high-density lipoprotein cholesterol (HDL), low-density lipoprotein cholesterol (LDL), and hormones (insulin and leptin) were analysed. Glucose, TChol, HDL and LDL were measured using an automatic enzymatic analysis system (Biochemical analyzer BS-200, Mindray, China). The leptin and insulin levels were determined by enzyme-linked immunosorbent assay methodology using commercial kits (Linco Research Inc., St. Louis, MO, USA).
Morphological and histological analysis
After the initial moment of obesity, the heart weight (HW), HW/final body weight (FBW) ratio, papillary muscle cross-sectional area (CSA) and collagen fraction (n = 14; each group) were recorded.
Papillary Muscle Function
Papillary muscles isolated from the LV were evaluated as previously described.17The papillary muscles were evaluated under the baseline condition of 2.5 mM Ca2+, post-rest contraction (PRC) and after elevation of extracellular Ca2+ concentration. PRC was studied at an extracellular Ca2+ concentration of 0.5 mM, in which the stimulus was paused for 10, 30, and 60 s before restarting the stimulation. Inotropic responses were recorded 5 min after the addition of each dose of extracellular Ca2+ (0.5, 1.0, 1.5, 2.0, and 2.5 mM) to the bathing solution.
Western Blot analysis
LV tissue (C; n = 6; HF; n = 6) was analysed by Western Blot to quantify the L-type Ca2+ channel, SERCA2A: Sarcoplasmic reticulum Ca2+ ATPase (SERCA2a) and phospholamban (PLB). expression as previously described.20 Specific antibodies were obtained against SERCA2 ATPase (ABR, Affinity BioReagents, CO, USA; MA3-910, 1:2,500), PLB (ABR, Affinity BioReagents, CO, USA;MA3-922, 1:500) and L-type Ca2+ channel alpha 1C (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO;C4980, 1:200). Binding of the primary antibody was detected with peroxidase-conjugated secondary antibodies (rabbit or mouse, depending on the protein). Quantification of blots was performed by Scion Image software (Scion based on NIH image). Targeted bands were normalized to the expression of b-actin by using an antibody (SC81178; 1:1000) obtained from Santa Cruz Biotechnology (CA, USA).
Statistical analysis
The statistical analysis was performed using the Sigma Stat 3.5 software (SYSTAT Software Inc., San Jose, CA, USA). The distribution of the variables was assessed by using the Kolmogorov-Smirnov test for normality, and the results were reported as means ± standard deviation (SD). Comparisons between groups were performed using Student'st-test for independent samples and a repeated-measures two-way analysis of variance (ANOVA) when appropriate. The level of significance considered was 5%.
The sample size (n) was estimated using the equation: n = [(Z1-α/2 + Z1-β) x r/Δ)2, where n is the sample size, Z is the z score, a is the two-sided significance level (0.05; type I error), b is the statistical power (80%; type II error), r is the SD and Δ is the minimal difference between groups. 23The sample size needed to detect a significant between groups is 10 rats per group; however, we decided to use 19 animals per group for most of the analyses.
Results
BW was similar in the first two weeks of treatment in both groups C and HF (data not shown); however, during the third week, BW was greater in group HF than in group C. This moment was characterized as the initial moment of obesity.
Table 1 shows the general characteristics, comorbidities and hormone results from C and HF rats after characterizing the initial moment of obesity (3 weeks). The FBW and weight gain were both higher in HF than in C. The high-fat diet promoted a substantial elevation of epididymal and visceral fat pad weight and BF. However, initial BW and retroperitoneal fat pad weight did not differ between the groups. AI was higher in HF animals (14.5%) compared to C animals. Compared with C group, HF had a lower FC, a greater FE, but a similar EI. Glucose, T-Chol and HDL levels, and SBP were similar between the groups. However, the AUC for glucose obtained in the insulin tolerance test, and LDL, insulin and leptin levels were significantly higher in HF compared to C.
General characteristics, comorbidities and hormones
Variables
Groups
C (n = 19)
HF (n = 19)
IBW, g
148 ± 12
147 ± 12
FBW, g
290 ± 18
302 ± 22*
WG, g
142 ± 10
155 ± 10*
Epididymal, g
4.6 ± 0.8
5.6 ± 1.2*
Retroperitoneal, g
5.4 ± 1.5
6.4 ± 1.7
Visceral, g
4.1 ± 1.0
4.9 ± 0.9*
BF, g
14.1 ± 3.0
16.9 ± 3.2*
AI, %
4.9 ± 1.0
5.6 ± 0.9*
Glucose, mg/dL
182 ± 27
181 ± 21
AUC, mg/dL/min
2129 ± 193
230 8 ± 218*
T-Chol, mg/dL
63.2 ± 10.4
68.3 ± 6.1
HDL, mg/dL
49.2 ± 7.7
52.9 ± 4.7
LDL, mg/dL
9.0 ± 1.7
10.4 ± 2.4*
SBP, mmHg
127 ± 8
131 ± 14
Insulin, ng/mL
0.83 ± 0.16
1.16 ± 0.28*
Leptin, ng/mL
2.34 ± 0.57
3.80 ± 1.26*
Values are means ± SD; control (C) and high-fat diet (HF) groups; n: number; IBW: initial body weight; FBW: final body weight; WG: weight gain; BF: body fat; AI: adiposity index; AUC: area under the curve for glucose determined in insulin tolerance test (ITT); T-Chol: total cholesterol; HDL: high density lipoprotein cholesterol; LDL: low density lipoprotein cholesterol; SBP: systolic blood pressure;
p < 0.05 vs. C. Student's t-test for independent samples.
The morphological and histological analyses are presented in Figure 1. Heart weight (Figure 1A), heart/FBW ratio (Figure 1B), myocyte CSA (Figure 1C), and LV collagen fraction (Figure 1D) were similar between the groups.
Morphological analysis of control (C) versus high-fat diet (HF) rats. A: Heart weight. B: Heart/final body weight ratio. C: Myocyte cross-sectional area (40× magnification lens); representative haematoxylin and eosin-stained left ventricular cross-sections from C and HF rats. D: Interstitial collagen volume fraction of myocardium (20× magnification lens) from C and HF rats; representative picrosirius red-stained left ventricular sections from C and HF rats. Arrows represent the interstitial collagen volume fraction of C and HF. Data presented as the mean ± SD. Student’s t test was used for independent samples. There are no differences between groups
Echocardiographic evaluation showed that the HF rats did not show a difference in heart rate (HR), left ventricular end-diastolic dimension (LVDD), left ventricular end-systolic dimension (LVSD), posterior wall thickness in diastole (PWTd), relative wall thickness (RWT), left atrium (LA), left ventricular mass (LVM), fractional shortening (FS) endocardial, FS midwall, posterior wall shortening velocity (PWSV), earlydiastolic mitral inflow (E-wave), latediastolic mitral inflow (A-wave), early-to-late diastolic mitral inflow ratio (mitral E/A), E-wave deceleration time (EDT) or isovolumetric relaxation time (IVRT) compared to C rats (Table 2). However, the HF group presented higher aortic diameter (AO) in relation to C. After 3 weeks, the treatment did not promote contractile dysfunction in basal condition or after Ca2+ stimulation (Figure 2). However, the results demonstrated that during manoeuvre PRC, an increase in contractile phase was observed after 60 seconds in group HF compared to C, as visualized by positive tension derivative normalized per CSA (+dT/dt) (C: 52.6 ± 9.0 g/mm2/s and HF: 68.0 ± 17.0 g/mm2/s; p < 0.05) (Figure 2E). Figure 3(A-C) shows that 3 weeks of high-fat feeding did not alter the protein levels of the L-type Ca2+ channel, SERCA2a or PLB.
Echocardiography data
Variables
Groups
C (n = 10)
HF (n= 10)
HR, bpm
341 ± 40
316 ± 22
LVDD, mm
7.85 ± 0.53
7.98 ± 0.37
LVSD, mm
3.66 ± 0.63
3.70 ± 0.44
PWTd, mm
1.47 ± 0.06
1.44 ± 0.07
RWT
0.19 ± 0.02
0.18 ± 0.01
AO, mm
3.39 ± 0.14
3.53 ± 0.13*
LA, mm
5.27 ± 0.32
5.39 ± 0.31
LVM, g
0.81 ± 0.06
0.83 ± 0.10
FS endocardial, %
53.6 ± 5.7
53.6 ± 4.5
FS midwall, %
33.0 ± 3.0
33.9 ± 3.7
PWSV, mm/s
40.38 ± 5.49
38.79 ± 3.05
E-Wave (cm/s)
94.5 ± 13.6
87.4 ± 3.9
A-Wave (cm/s)
67.4 ± 18.7
60.2 ± 4.7
Mitral E/A
1.4 ± 0.4
1.5 ± 0.2
EDT, ms
42.0 ± 4.8
43.8 ± 4.9
IVRT, ms
20.4 ± 3.1
20.1 ± 3.8
Data presented as the mean ± standard deviation. C: control and HF: high-fat diet groups; n: number; HR: heart rate; LVDD: left ventricular end-diastolic dimension; LVSD: left ventricular end-systolic dimension; PWTd: posterior wall thickness in diastole; RWT: relative wall thickness; AO: aortic diameter; LA: left atrium; LVM: left ventricle mass; FS endocardial: fractional shortening; FS midwall: fractional shortening; PWSV: posterior wall shortening velocity;early (E-wave) and late (A-wave) diastolic mitral inflow; E/A: early-to-late diastolic mitral inflow ratio; EDT: E-wave deceleration time; IVRT: isovolumetric relaxation time;
p < 0.05 versus C (control). Student's t test for independent samples.
Basal condition (A, B and C), post-rest contraction (D, E and F) and effects of increasing extracellular Ca<sup>2+</sup> concentration (G, H and I ) in papillary muscles of control (C) and high-fat diet (HF) rats (white bars = C; black bars = HF; n = 19 in each condition). Maximum developed tension normalized percross-sectional area (DT) [g/mm<sup>2</sup>], negative (-dT/dt[g/mm<sup>2</sup>/s]) and positive (+dT/dt[g/mm<sup>2</sup>/s]) tension derivatives normalized per cross-sectional area. Data presented as the means ± SD. *p < 0.05 versus C. Student’s t-test for independent samples (A, B and C) and repeated-measures two-way ANOVA (D, E, F, G, H and I); Student-Newman-Keuls post-hoc test
Cardiac protein expression by Western Blot. The data are means ± SD (n = 6 in each group); control (C) and high-fat diet (HF); A: L-type Ca<sup>2+</sup> channel; B: Sarcoplasmic reticulum Ca<sup>2+</sup> ATPase (SERCA2a) and C: phospholamban (PLB). Student’s t-test for independent samples
Discussion
The determination of the initial moment of obesity is essential to control the duration of experimental protocols because it allows one to accurately assess the influence of exposure to adiposity and, consequently, obesity.16 Interestingly, little information is available on this process and its cardiovascular consequences.
Some researchers have shown metabolic, cardiac and molecular characteristics only at the end of the experiment,17,20,24 which precludes analyses regarding the precise onset of disturbances caused by excess adipose tissue and their intensity. A question that arises from the present study is why the experimental studies have not characterized the initial moment of obesity. Thus, the major finding was that there were alterations in the metabolic and lipid profiles at the initial moment of obesity, but without accompanying cardiac damage or changes to Ca2+ handling proteins.
High-fat diets are generally accepted as a method of generating a valid rodent model for obesity. According to the data obtained, we developed a valid rodent model for diet-induced obesity with unsaturated fat. After 3 weeks, HF animals showed higher weight gain (16%) and body fat (20%) than C animals. The findings are in agreement with several authors.18-20,24 In addition, the animal model presented some features of metabolic syndrome, such as central obesity, glucose intolerance and dyslipidemia, but without alterations in SBP, thus demonstrating obesity with its comorbidities. In contrast, previous investigations have observed numerous comorbidities associated with short-term obesity, such as hypertension and diabetes.25,26
The initial moment of obesity caused important metabolic abnormalities, such as elevated leptin (62.5%) and insulin (40%) levels in the HF group. According to the literature, leptin is a hormone secreted by adipose tissue and has a direct relationship with the amount of BF.27 The relationship between leptin levels and fat shows that the amount of leptin is approximately 3 times higher than BF. Furthermore, leptin is able to directly activate nitric oxide production via L-arginine, which is dependent on endothelial integrity27 and may be a determining factor in the absence of hypertension. In addition, hyperinsulinemia was observed with insulin sensitivity damage, since the glucose AUC was higher in group HF than group C.
The initial moment of obesity did not cause cardiac remodelling, as visualized by histological and echocardiographic analysis. Dhanasekaran et al.28 reported that insulin resistance induced by obesity with associated hyperinsulinemia could promote cardiac remodelling via the growth-promoting properties of insulin or by attenuating the anti-apoptotic signalling of the phosphatidylinositol 3' -kinase/protein kinase B pathway.29 Studies in mice with (functional) leptin deficiency have suggested that the cardiac hypertrophy developing in states of chronic hyperleptinaemia may result from an inability to transduce anti-hypertrophic and/or cardioprotective effects of the adipokine.29
Nonetheless, obesity is still considered a risk factor in the development of cardiovascular disorders, despite the called "obesity paradox". A number of rodent models of obesity have been studied in terms of cardiovascular adaptations. 12,15,24 Diet-induced obese rats exhibit many of the hemodynamic alterations associated with human obesity, but there is no evidence to date that these animals will develop severe cardiac depression. In the current study, echocardiographic and papillary muscle analysis showed that there was no change in cardiac parameters in both groups. The absence of functional changes may be due to the short term of the exposure to HF diet.
According to the results, short-term exposure to HF diet promoted specific changes at contraction phase after the PRC manoeuvre, indicating absence of myocardial function impairment. This result could be related to Ca handling changes; however, our results show that there was no change in the levels of Ca2+ L-type channels, PLB or SERCA2a protein, suggesting that the kinetic properties of calcium are preserved in the onset of obesity. Furthermore, the post-translational modifications known to affect the activity of these proteins, such as phosphorylation and glycosylation, were not investigated in the present study.
Study limitations
The study did not investigate post-translational modifications known to affect the activity of proteins, such as phosphorylation and glycosylation, which could consolidate the absence of alterations in the expression of proteins involved in the intracellular calcium handling at the initial moment of obesity.
Conclusion
The initial moment of obesity promotes alterations to hormonal and lipid profiles without cardiac damage and changes to Ca2+ handling in a rat model of unsaturated high-fat diet-induced obesity. Taken together, these findings could be relevant to human pathology and enable the verification and prevention of disturbances in the early period of obesity.
Acknowledgments
This manuscript has been proofread and edited by native English speakers with related biomedical backgrounds from the American Journal Experts.
Sources of Funding
This study was funded by FAPES and FAPESP.
Study Association
This study is not associated with any thesis or dissertation work.
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E-mail: andresoaresleopoldo@gmail.com, andre.leopoldo@ufes.br
Contribuição dos autores
Concepção e desenho da pesquisa: Jacobsen BB, Cicogna AC, Leopoldo APL, Leopoldo AS; Obtenção de dados: Jacobsen BB, Cordeiro JP, Campos DHS, Nascimento AF, Sugizaki MM, Cicogna AC,; Análise e interpretação dos dados e Revisão crítica do manuscrito quanto ao conteúdo intelectual importante: Jacobsen BB, Cordeiro JP, Campos DHS, Nascimento AF, Sugizaki MM, Cicogna AC, Padovani CR, Leopoldo APL, Leopoldo AS; Análise estatística: Cicogna AC, Padovani CR; Obtenção de financiamento: Cicogna AC, Leopoldo APL, Leopoldo AS; Redação do manuscrito: Jacobsen BB, Sugizaki MM, Cicogna AC, Padovani CR, Leopoldo APL, Leopoldo AS.
Potencial conflito de interesses
Declaro não haver conflito de interesses pertinentes.
ResumoFundamentos:
Diferentes tipos de dietas hiperlipídicas e/ou hipercalóricas têm sido usados para induzir obesidade em roedores. No entanto, poucos estudos relataram os efeitos da obesidade induzida por dieta hiperlipídica em sua fase inicial sobre a remodelação cardíaca funcional e estrutural.
Objetivo:
Caracterizar o momento inicial da obesidade e investigar parâmetros metabólicos e cardíacos. Além disso, analisar o papel do trânsito de Ca+2 em curtos períodos de exposição à obesidade.
Métodos:
Ratos Wistar com idade de 30 dias foram distribuídos aleatoriamente em dois grupos (n = 19 em cada grupo): controle (C, dieta padrão) e dieta hiperlipídica (HL, dieta rica em gordura insaturada). O momento inicial da obesidade foi definido por medidas semanais do peso corporal, complementadas pelo índice de adiposidade (IA). A remodelação cardíaca foi avaliada por análise morfológica, histológica, ecocardiográfica e funcional dos músculos papilares. Proteínas envolvidas no trânsito de Ca2+ foram determinadas por Western Blot.
Resultados:
O momento inicial da obesidade ocorreu na terceira semana. Em comparação aos ratos C, os animais HL apresentaram maior peso corporal final (4%), gordura corporal (20%), IA (14,5%), níveis de insulina (39,7%), leptina (62,4%) e lipoproteína de baixa densidade (15,5%), mas não apresentaram alterações na pressão sistólica. A avaliação ecocardiográfica não mostrou alterações nos parâmetros cardíacos. No grupo HL, observou-se um aumento no +dT/dt (C: 52,6 ± 9,0 g/mm2/s e HL: 68,0 ± 17,0 g/mm2/s; p < 0,05) muscular. Além disso, não houve alterações na expressão cardíaca de proteínas envolvidas no trânsito de Ca2+.
Conclusão:
O momento inicial da obesidade promove alterações nos perfis hormonais e lipídicos sem causar danos cardíacos ou mudanças no trânsito de Ca2+.
A obesidade é considerada uma importante síndrome do século XXI que alcançou proporções epidêmicas em todo o mundo nas últimas décadas.1,2 De acordo com a Organização Mundial da Saúde, o número de pessoas com sobrepeso ultrapassou um bilhão de pessoas, sendo que mais de 30% dessa população é obesa.3 A obesidade é uma doença complexa e, enquanto alguns autores sugeriram que fatores genéticos contribuam para seu desenvolvimento,4 a maioria dos estudos enfatizam que as principais causas da obesidade são os chamados fatores exógenos, particularmente o consumo e a alta disponibilidade de alimentos palatáveis, e a falta de exercícios físicos.2,5
Diferentes tipos de dietas hiperlipídicas (HL) e/ou hipercalóricas são utilizadas para induzir a obesidade e simular, em roedores, a síndrome metabólica que ocorre em humanos.6-11 No entanto, poucos estudos investigaram o estágio inicial da obesidade induzida por uma dieta rica em gorduras. Pesquisadores observaram o momento inicial da obesidade em animais alimentados por uma dieta HL após 4 semanas de tratamento.12-15 Contudo, não foram apresentados parâmetros moleculares e cardíacos nesse estágio inicial.
Estudos mostraram que o excesso de gordura causa anormalidades cardiovasculares que se correlacionam com a duração e a intensidade da obesidade tanto em modelos com humanos como em modelos com animais.16-20 Assim, torna-se necessário identificar a duração e a intensidade dos danos no período inicial da doença. Além disso, é importante verificar os mecanismos envolvidos nesse processo, uma vez que estudos mostraram que distúrbios no trânsito de Ca2+ podem ser responsáveis pelo desenvolvimento de disfunção cardíaca em modelos de obesidade induzidos por uma dieta HL.
Devido à ausência de estudos, nosso objetivo foi caracterizar o momento inicial da obesidade e investigar tantos parâmetros metabólicos como cardíacos em ratos obesos. Além disso, avaliamos o papel do trânsito de Ca2+ em curtos períodos de exposição à obesidade.
MétodosCuidado dos animais
Todos os experimentos e procedimentos foram realizados de acordo com o Guia para o Cuidado e Uso de Animais de Laboratório (Guide for the Care and Use of Laboratory Animals) publicado pelo Instituto Nacional de Saúde dos EUA (U.S. National Institutes of Health) e aprovados pelo Comitê de Ética da Faculdade de Medicina de Botucatu (UNESP, Botucatu, SP, Brasil) (número -PE-5/2009).
Ratos Wistar com idade de 30 dias foram distribuídos em dois grupos - controle (C, n = 19) e dieta HL (n = 19). O grupo C recebeu uma dieta padrão contendo 12,3% de sua energia de gordura, 57,9% de carboidratos, e 29,8% de proteína. O grupo HL recebeu quatro dietas (RC Focus 2413, 2414, 2415, e 2416) que se diferiram quanto ao sabor, mas não quanto ao teor de micro e macronutrientes. As dietas HLs continham 49,2% de sua energia em gordura, 28,% em carboidratos, e 21,9% em proteína, como descrito anteriormente.17 Todos os ratos foram mantidos em gaiolas individuais em um ambiente de ar limpo e temperatura e umidade controladas -23 ± 3°C, em um ciclo claro/escuro de 12/12 horas (luzes acessas às 6h da manhã) e umidade relativa de 60 ± 5%. Após o início do protocolo experimental, o consumo alimentar (CA), a Ingestão calórica (IC), a eficiência alimentar (EA) e o peso corporal (PC) foram analisados semanalmente. A IC correspondeu ao consumo alimentar médio semanal multiplicado pelo valor energético (kcal) da dieta. A EA (%) é a habilidade de converter o IC em PC, determinada pela média do ganho de peso (g) dividido pela ingestão energética total (Kcal) x 100.
Caracterização do momento inicial da obesidade
Após o início do protocolo experimental, o peso corporal (PC) foi registrado uma vez por semana para caracterizar o momento inicial da obesidade. Quando os grupos C e HL apresentaram diferença significativa no PC, os animais foram anestesiados por injeção intraperitoneal de cetamina (50 mg/kg) e xilazina (0.5 mg/kd), decapitados e toracotomizados, e o tecido adiposo dissecado e pesado. O momento inicial da obesidade foi definido por medidas de PC (g) registrados semanalmente, complementadas pelo índice de adiposidade (IA) post-mortem utilizando a fórmula: IA = [gordura corporal (GC) / PC] x 100. A GC (g) foi medida pela soma dos seguintes constituintes do tecido adiposo: gordura epididimal + gordura retroperitoneal + gordura visceral.
Pressão sistólica
A pressão sistólica da cauda do rato foi medida uma semana anterior à eutanásia utilizando-se um pletismógrafo de cauda. Os animais foram mantidos em uma caixa de madeira a 40ºC por 4 minutos para vasodilatação da artéria da cauda, e em seguida transferidos para um suporte cilíndrico de ferro. Um sensor foi colocado na região proximal da cauda e acoplado a um esfigmomanômetro eletrônico (Narco BioSystem, International Biomedical Inc, TX, EUA). O esfigmomanômetro eletrônico foi conectado a um computador, e a PAS medida usando-se o programa Biopac software (Biopac Systems Inc., CA, EUA).
Teste de tolerância à insulina (TTI)
As amostras de sangue foram coletadas da extremidade da cauda em condição basal e após administração intraperitoneal de insulina regular (Novolin® R, Novo Nordisk, Bagsvaerd, Dinamarca) a uma dose de 1,5 UI/kg de peso corporal.21 As amostras de sangue para dosagem de glicose foram coletadas em 0 (basal), 5, 10, 15, 20, 25 e 30 minutos. Os níveis de glicose foram determinados usando um glicosímetro manual (Accu-Chek Advantage; Roche Diagnostics Co., Indianápolis, EUA). A resistência insulínica foi determinada a partir da área sob a curva (AUC; 0-30 minutos) para glicose.
Avaliação ecocardiográfica
Uma semana anterior à eutanásia, realizou-se avaliação ecocardiográfica por meio de umecocardiógrafo disponível comercialmente (Philips HDI-5000), e as variáveis estruturais do ventrículo esquerdo (VE) foram analisadas conforme descrito anteriormente.22
Perfil metabólico e hormonal
As amostras de sangue foram coletadas, e o soro separado por centrifugação a 3000 x g por 15 minutos a 4oC. Foram analisados os níveis de glicose, colesterol total (CT), lipoproteína de alta densidade (HDL), lipoproteína de baixa densidade (LDL), e dos hormônios insulina e leptina. Os níveis de glicose, CT, HDL e LDL foram medidos por um sistema automático de análise enzimática (Biochemical analyzer BS-200, Mindray, China). Os níveis de leptina e de insulina foram determinados pelo método de imunoadsorção enzimática (ELISA), usando-se kits comerciais (Linco Research Inc., St. Louis, MO, EUA).
Análise morfológica e histológica
Após o momento inicial da obesidade, foram registados o peso do coração, a razão peso do coração/peso corporal final, área seccional transversa do músculo papilar e fração de colágeno de cada grupo.
Estudo funcional do músculo papilar isolado
Os músculos papilares isolados do VE foram avaliados conforme descrito anteriormente.17 Os músculos papilares foram avaliados em condição basal (Ca2+ a 2,5 mM), na Contração pós-pausa (CPP) e após elevação da concentração extracelular de Ca2+. A CPP foi estudada a uma concentração de Ca2+ extracelular de 0,5 mM, na qual o estímulo foi interrompido por 10, 30 e 60 segundos antes de se reiniciar a estimulação. As respostas inotrópicas foram registradas 5 minutos após adição de cada dose extra de Ca2+ extracelular (0,5; 1,0; 1,5; 2,0, e 2,5 mM) à solução do banho.
Western Blot
O tecido do VE (C; n = 6; HL; n = 6) foi analisado por Western Blot para quantificar a expressão de canal de Ca2+ do tipo L, fosfolamban (PLB) e Ca2+ ATPase do retículo sarcoplasmático (SERCA2a) como descrito anteriormente.20 Foram obtidos anticorpos específicos contra SERCA2 (ABR, Affinity BioReagents, CO, EUA; MA3-910, 1:2,500), PLB (ABR, Affinity BioReagents, CO, EUA; MA3-922, 1:500) e canal de Ca2+ do tipo L alfa 1C (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO; C4980, 1:200). A ligação do anticorpo primário foi detectada com anticorpos secundários conjugados com peroxidase (coelho ou camundongo, dependendo da proteína). A quantificação dos blots foi realizada pelo programa Scion Image (Scion com base nas imagens do National Institutes of Health). As bandas-alvo foram normalizadas à expressão de β-actina utilizando-se um anticorpo (SC81178; 1:1000) obtido da Santa Cruz Biotechnology (CA, EUA).
Análise estatística
A análise estatística foi realizada pelo programa Sigma Stat 3.5 (SYSTAT Software Inc., San Jose, CA, EUA). A distribuição das variáveis foi avaliada quanto à normalidade pelo teste de Kolmogorov-Smirnov, e os resultados expressos em média ± desvio padrão (DP). Comparações entre os grupos foram realizadas pelo teste t de Student para amostras independentes e análise de variância (ANOVA) com dois fatores para medidas repetidas. O nível de significância considerado foi de 5%.
O tamanho amostral foi estimado a partir da equação n = [(Z1-α/2 + Z1-β) x r/Δ)2, em que “n” é o tamanho da amostra, Z é o z-score, α é o nível de significância bicaudal (0,05; erro tipo I), β é o poder estatístico (80%; erro tipo II), r é o DP e Δ é a mínima diferença entre os grupos.23 O tamanho da amostra necessário para detectar diferença significativa entre os grupos era de 10 ratos por grupo. No entanto, decidimos usar 19 animais por grupo para a maioria das análises.
Resultados
O PC foi similar nas duas primeiras semanas de tratamento em ambos os grupos C e HL (dados não apresentados). Contudo, durante a terceira semana, o PC foi maior no grupo HL que no grupo C. Este momento foi caracterizado como o momento inicial da obesidade.
A Tabela 1 apresenta características gerais, comorbidades e resultados hormonais dos ratos C e HL após caracterização do momento inicial da obesidade (3 semanas). O peso corporal final e o ganho de peso foram maiores no grupo HL que no grupo C. A dieta HL promoveu um aumento substancial do tecido adiposo epididimal e visceral, e da GC. Entretanto, o PC inicial e o peso de gordura retroperitoneal não foram diferentes entre os grupos. O IA foi maior nos animais do grupo HL (14,5%)em comparação aos animais C. Em comparação ao grupo C, o grupo HL apresentou um consumo alimentar mais baixo, uma maior EA, mas uma IC similar. Os níveis de glicose, CT e HDL, e a PS foram similares entre os grupos. No entanto, a AUC para a glicose obtida no teste de tolerância à insulina, e os níveis de LDL, insulina e leptina foram significativamente maiores no grupo HL que no grupo C.
Características gerais, comorbidades e hormônios
Variáveis
Grupos
Controle (n = 19)
Hiperlipídico (n = 19)
Peso corporal inicial, g
148 ± 12
147 ± 12
Peso corporal final,g
290 ± 18
302 ± 22*
Ganho de peso, g
142 ± 10
155 ± 10*
Epididimal, g
4,6 ± 0,8
5,6 ± 1,2*
Retroperitoneal, g
5,4 ± 1,5
6,4 ± 1,7
Visceral, g
4,1 ± 1,0
4,9 ± 0,9*
Gordura corporal, g
14,1 ± 3,0
16,9 ± 3,2*
Índice de adiposidade, %
4,9 ± 1,0
5,6 ± 0,9*
Glicose, mg/dL
182 ± 27
181 ± 21
Área sob a curva, mg/dL/min
2129 ± 193
2308 ± 218*
Colesterol total, mg/dL
63,2 ± 10,4
68,3 ± 6,1
HDL - colesterol, mg/dL
49,2 ± 7,7
52,9 ± 4,7
LDL-colesterol, mg/dL
9,0 ± 1,7
10,4 ± 2,4*
Pressão sistólica, mmHg
127 ± 8
131 ± 14
Insulina, ng/mL
0,83 ± 0,16
1,16 ± 0,28*
Leptina, ng/mL
2,34 ± 0,57
3,80 ± 1,26*
Valores em média ± DP; HDL: lipoproteína de alta densidade; LDL: lipoproteína de baixa densidade;
p < 0,05 vs. Controle. Teste t de Student para amostras independentes.
As análises morfológicas e histológicas são apresentadas na Figura 1. O peso do coração (Figura 1A), a razão coração/peso corporal final (Figura 1B), a área seccional transversa dos miócitos (Figura 1C), e a fração de colágeno do VE (Figura 1D) foram similares entre os grupos.
Análise morfológica dos ratos controles (C) versusratos que receberam dieta hiperlipídica (HL). A: peso do coração. B: razão coração/peso corporal final. C: área seccional transversa dos miócitos (aumento 40×); cortes transversais do ventrículo esquerdo corados com hematoxilina e eosina de ratos C e HL. D: fração de colágeno intersticial (aumento 20×) de ratos C e HL; seções do ventrículo esquerdo coradas em picrosirius de ratos C e HL. Setas representama fração de volume de colágeno intersticialde C e HL. Dados apresentados em média ± DP. O teste t de Student foi usado para amostras independentes. Não há diferença entre os grupos.
A avaliação ecocardiográfica mostrou que os ratos HL não apresentaram diferença na frequência cardíaca (FC), diâmetro diastólico final do VE (DDVE), diâmetro sistólico final do VE (DSVE), espessura da parede posterior na diástole (EPPd), espessura relativa da parede (ERP), diâmetro do átrio esquerdo (AE), massa do VE, fração de encurtamento endocárdico (FE), FE mesocárdico, velocidade de encurtamento da parede posterior (VEPP), velocidade do fluxo transvalvar mitral correspondente à fase de enchimento inicial (onda-E),velocidade do fluxo transvalvar mitral correspondente à fase de enchimento tardia consequente à contração atrial (onda-A), razão da onda-E/onda-A (E/A mitral), tempo de desaceleração da onda-E (TDE) e tempo de relaxamento isovolumétrico (TRIV) em comparação aos ratos C (Tabela 2). Entretanto, o grupo HL apresentou maior dimensão da aorta em comparação ao grupo C. Após 3 semanas, o tratamento não promoveu disfunção miocárdica na condição basal ou após estimulação com Ca2+(Figura 2). Contudo, os resultados mostraram que durante a manobra de CPP, observou-se aumento na fase contrátil após 60 segundos no grupo HL em comparação ao grupo C, visualizado pela derivada positiva normalizada por área seccional transversa (+dT/dt) (C: 52,6 ± 9,0 g/mm2/s e HL: 68,0 ± 17,0 g/mm2/s; p < 0,05) (Figura 2E). AFigura 3 (A-C) mostra que 3 semanas de dieta HL não alterou os níveis de proteína do canal Ca2+ do tipo L, SERCA2a ou PLB.
Dados da ecocardiografia
Variáveis
Grupos
Controle (n = 10)
Hiperlipídico (n = 10)
Frequência cardíaca, bpm
341 ± 40
316 ± 22
DDVE, mm
7,85 ± 0,53
7,98 ± 0,37
DSVE, mm
3,66 ± 0,63
3,70 ± 0,44
EPP, mm
1,47 ± 0,06
1,44 ± 0,07
ERP
0,19 ± 0,02
0,18 ± 0,01
DA, mm
3,39 ± 0,14
3,53 ± 0,13*
Diâmetro do AE, mm
5,27 ± 0,32
5,39 ± 0,31
Massa do VE, g
0,81 ± 0,06
0,83 ± 0,10
FE endocardíco, %
53,6 ± 5,7
53,6 ± 4,5
FE mesocárdico, %
33,0 ± 3,0
33,9 ± 3,7
VEPP, mm/s
40,38 ± 5,49
38,79 ± 3,05
Onda-E- (cm/s)
94,5 ± 13,6
87,4 ± 3,9
Onda -A (cm/s)
67,4 ± 18,7
60,2 ± 4,7
E/A mitral
1,4 ± 0,4
1,5 ± 0,2
TDE, ms
42,0 ± 4,8
43,8 ± 4,9
TRIV, ms
20,4 ± 3,1
20,1 ± 3,8
Dados apresentados em média ± desvio padrão. DDVE: diâmetro diastólico final do ventrículo esquerdo; DSVE: diâmetro sistólico final do ventrículo esquerdo; EPPD: espessura da parede posterior na diástole; ERP: espessura relativa da parede; DA: dimensão da aorta; AE: átrio esquerdo; VE: ventrículo esquerdo; FE: fração de encurtamento endocárdico; VEPP: velocidade de encurtamento da parede posterior; onda-E: velocidade do fluxo transvalvar mitral correspondente à fase de enchimento inicial; onda-A: velocidade do fluxo transvalvar mitral correspondente à fase de enchimento tardia consequente à contração atrial; E/A mitral: razão onda-E/onda-A; TDE: tempo de desaceleração da onda-E; TRIV: tempo de relaxamento isovolumétrico.
Condiçãobasal (A, B e C), contração pós-pausa (CPP) (D, E e F) e efeitos da concentração crescente de Ca<sup>2+</sup> extracelular (G, H e I) nos músculos papilares de ratos controles (C) e de ratos que receberam dieta hiperlipídica (HL) (colunas brancas = C; colunas pretas = HL; n = 19 em cada condição). Tensão máxima normalizada por área seccional transversa (TD) [g/mm<sup>2</sup>], derivadas da tensão negativa (-dT/dt[g/mm<sup>2</sup>/s]) e positiva (+dT/dt[g/mm<sup>2</sup>/s]) normalizadas por área seccional transversa. Dados apresentados em média ± DP. *p 0,05 versus C. Teste t de Student para amostras independentes (A, B e C) e ANOVA com dois fatores para medidas repetidas (D, E, F, G, H e I); teste post-hoc de Student-Newman-Keuls
Expressãode proteína cardíaca por Western Blot. Dados apresentados em média ± DP (n = 6 em cada grupo); controle (C) e dieta hiperlipídica (HL); A: canal de Ca<sup>2+</sup> do tipo L; B: Ca<sup>2+</sup>-ATPase do retículo sarcoplasmático (SERCA2a) e C: fosfolamban (PLB). Teste t de Student para amostras independentes.
Discussão
A determinação do momento inicial da obesidade é essencial para controlar a duração dos protocolos experimentais, pois permite avaliar, com precisão, a influência da exposição à adiposidade e, consequentemente, da obesidade.16 Interessante notar que há pouca informação disponível sobre esse processo bem como das consequências cardiovasculares.
Alguns pesquisadores apresentaram características metabólicas, cardíacas e moleculares apenas no final do experimento,17,20,24 o que limita a análise do início exato dos distúrbios causados pelo excesso de tecido adiposo e de sua intensidade. Uma pergunta que surge a partir do presente estudo é o porquê de estudos experimentais não haverem caracterizado o momento inicial da obesidade. Portanto, nosso principal achado foi a existência de alterações nos perfis metabólicos e lipídicos no momento inicial da obesidade, que não são acompanhadas por danos cardíacos ou alterações nas proteínas de transporte do Ca2+.
As dietas HLs são em geral aceitas como um método para gerar um modelo válido de obesidade em roedores. De acordo com os dados obtidos, nós desenvolvemos um modelo válido em roedores de obesidade induzida pela dieta com uso de gordura insaturada. Após três semanas, os animais HL apresentaram maior ganho de peso (16%) e de gordura corporal (20%) que os animais C. Esses resultados estão de acordo com os relatados por vários autores.18-20,24 Além disso, o modelo animal apresentou algumas características de síndrome metabólica, tais como obesidade central, intolerância à glicose e dislipidemia, mas sem alterações na PS, mostrando, assim, a obesidade e suas comorbidades. Por outro lado, estudos prévios mostraram várias comorbidades associadas com obesidade em curto prazo, tais como hipertensão e diabetes.25,26
O momento inicial da obesidade causou anormalidades metabólicas importantes, tais como aumento dos níveis de leptina (62,5%) e insulina (40%) no grupo HL. Segundo a literatura, a leptina é um hormônio secretado pelo tecido adiposo, e tem uma relação direta com a quantidade de GC.27 A relação entre os níveis de leptina e gordura mostra que a quantidade de leptina é aproximadamente 3 vezes maior que a de GC. Além disso, a leptina é capaz de ativar diretamente a produção de óxido nítrico via L-arginina, que é dependente da integridade endotelial27 e pode ser um fator determinante na ausência de hipertensão. Ainda, foi observadahiperinsulinemia com danos na sensibilidade à insulina, uma vez que a AUC para a glicose foi maior no grupo HL que no grupo C.
O momento inicial da obesidade não causou remodelação cardíaca, segundo análises histológicas e ecocardiográficas. Dhanasekaran et al.28 relataram que a resistência insulínica induzida pela obesidade com hiperinsulinemia associada promoveu remodelação cardíaca por meio das propriedades anabólicas da insulina ou da atenuação da sinalização anti-apoptótica da via fosfatidilinositol 3’-quinase/proteína quinase B.29 Estudos em camundongos com deficiência (funcional) de leptina sugeriram que a hipertrofia cardíaca desenvolvida em estados de hiperleptinemia crônica pode resultar da incapacidade de se converter os efeitos anti-hipertróficos e/ou cardioprotetores da adipocina.29
No entanto, a obesidade ainda é considerada um fator de risco no desenvolvimento de doenças cardiovasculares, apesar do chamado “paradoxo da obesidade”. Muitos modelos de obesidade com roedores têm mostrado adaptações cardiovasculares.12,15,24 Ratos com obesidade induzida por dieta exibem alterações hemodinâmicas associadas à obesidade humana, mas não há evidência até o momento de que esses animais desenvolverão depressão cardíaca grave. No presente estudo, as análises ecocardiográficas e do músculo papilar mostraram que não houve alterações nos parâmetros cardíacos em nenhum dos grupos. A ausência de alterações funcionais pode ser devido à curta exposição a uma dieta HL.
De acordo com os resultados, a exposição à dieta HL em curto prazo promoveu alterações específicas na fase de contração após CPP, indicando ausência de alterações funcionais miocárdicas. Tal resultado poderia estar relacionado às mudanças no trânsito de cálcio; contudo, nossos resultados mostraram que não houve mudanças nos níveis de canais de Ca2+ tipo L, PLB ou proteína do SERCA2a, sugerindo que as propriedades cinéticas do cálcio estão preservadas no início da obesidade. Ainda, as modificações translacionais que sabidamente afetam a atividade dessas proteínas, tais como fosforilação e glicosilação, não foram investigadas neste estudo.
Limitações do estudo
O estudo não investigou modificações pós-translacionais conhecidas por influenciarem a atividade de proteínas, tais como fosforilação e glicosilação, o que poderia contribuir para consolidar a ausência de alterações na expressão das proteínas envolvidas no transporte de cálcio intracelular no momento inicial da obesidade.
Conclusão
O momento inicial da obesidade promove alterações nos perfis hormonais e lipídicos sem causar danos cardíacos ou alterações no transporte de Ca2+ em um modelo de obesidade induzida por dieta rica em gordura insaturada em ratos. Esses resultados podem ser relevantes à patologia humana e possibilitam a verificação e a prevenção dos distúrbios no período inicial da obesidade.
Agradecimentos
Este artigo foi revisado e editado pela American Journal Experts.
Fontes de financiamento
O presente estudo foi financiado pela FAPES e FAPESP.
Vinculação acadêmica
Não há vinculação deste estudo a programas de pós-graduação.